La concentración e integridad del ADN extraído

Alumno: Juárez Leal Alejandro.

• Discusión y conclusión.

La concentración e integridad del ADN extraído, así como el tamaño de distintos fragmentos de ADN por ejemplo productos de PCR pueden ser verificados mediante electroforesis en geles de agarosa o poliacrimida. Este proceso consiste en la separación de proteínas, isoenzimas, ácidos nucleicos, a través de una matriz tamponada para nuestro caso agarosa; esta funciona como filtro separando las moléculas en un campo eléctrico conforme al tamaño y carga neta que poseen. La resolución y velocidad de separación de fragmentos de ADN por este medio son reguladas a través de la concentración de agarosa en el gel y el voltaje aplicado. Al aumentar la concentración de la agarosa se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del  gel esto permite el análisis de fragmentos de menor longitud. La concentración de agarosa y el voltaje con los que se trabaja dependen del tamaño del segmento del DNA que se desea observar; los segmentos de gran tamaño, el ADN total (proveniente de una extracción de ADN), deben trabajarse con concentraciones del 0.8% y a voltajes de 60 V para evitar fragmentación de la muestra. Los segmentos de 1500 pb en adelante con geles al 1%, los segmentos de 500 a 1500 pb en 1,5% o 2% y los pequeños  segmentos de 100 a 500 pb en geles de 4% o 6 %(Posso 2009). De acuerdo con la anterior esto podría explicar por qué el patrón de bandeo tanto como para los sujetos experimentales femenino y masculino no muestran una tendencia comparable con los valores establecidos por el protocolo  de 192 pb para cromosoma X y 158 pb para el cromosoma  para el cromosoma Y.

Velarde, Molina, Solorzan, Cazares, Rendon, Murilllo y Rio (2008) indican en su artículo  de análisis molecular del gen de la amelogenina, que la presencia de una banda es indicativo de una mujer y de dos bandas de un varón así visualizamos como el primer pocillo que cumple con  las características mencionadas. Estos mismo en su artículo mencionan que en diversos estudios se han reportado una mutación en la región 3  donde se une el iniciador de reversa en el gen AMELY que interfiere y limita el uso de esta prueba, ocasionando que los varones sean identificados como mujeres(Steinlechner, Berger, Parson 2002; Roffey, Eckhoff, Kuhl 2000).

La idea de realizar de correr este gel era lograr una primera aproximación y determinar si al menos en las muestras biológicas contenían DNA; para nuestro caso vemos que tanto el tercer posillo correspondiente  al hombre y al cuarto posillo   de  mujer; existe presencia de  DNA con una tendencia bandeo más a identificar a ambos sujetos como femeninos.

Esta prueba es sencilla, laboriosa pero económica; solo que las limitaciones de reactivos por parte de la institución entorpecen su desempeño. Gracias al uso del PCR se requiere a cantidades de mínimas de material genético para lograr estas determinaciones. Podemos determinar que contamos con DNA genómico pero no podemos determinar el sexo de los sujetos de estudio.

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