La microscopía es el conjunto de técnicas que permite estudiar y observar objetos que no pueden ser vistos a simple vista

Universidad Andrés Bello[pic 1]

Facultad de Ciencias de la Salud

Laboratorio de Biología Celular BIO 131

TRABAJO PRÁCTICO Nº2:

Microscopía II

Introducción

La microscopía es el conjunto de técnicas que permite estudiar y observar objetos que no pueden ser vistos a simple vista, por lo cual, para facilitar esta tarea, se utiliza un microscopio. (1). Estas técnicas de observación han sido muy importantes desde su invención para distintas ramas de la ciencia e investigación. Ejemplo de lo anterior son los grandes avances en el descubrimiento de enfermedades y como afectan a las células del organismo (2) o el descubrimiento de organismos que nunca pudieron haber sido observados a simple vista.

Si bien la microscopia nos permite la observación de objetos microscópicos, también nos ayuda al estudio de tejidos u organismos, determinando sus característcas como tamaño, densidad, formas, entre otras (3).

Dependiendo de lo que se quiere estudiar u obtener de la observación, se usaran distintas técnicas o instrumentos en conjunto al microscopio.

En esta experiencia de laboratorio se observó una muestra fresca con microscopia de campo oscuro para poder observar relieves, también se utilizó una reglilla para poder medir el tamaño de células sanguíneas, además de utilizar una cámara de Neubauer para contar la cantidad de eritrocitos presentes en una muestra de sangre de cordero.

Antes de realizar el proceso experimental surgieron las siguientes interrogantes: ¿Es posible ver una imagen en tres dimensiones con un microscopio de campo oscuro? ¿Los tamaños obtenidos en la medición de las distintas células, serán iguales o cercanos al promedio ya establecido? ¿Se podrá contabilizar sin margen de error a través de un conteo mental la cantidad de células en una muestra fresca?

Con las distintas téctincas y herramientas existentes en la microscopía, veremos con mayor claridad los diferentes componentes de la muestra a observar en un campo oscuro, obtendremos de manera precisa las mediciones de las distintas células y contabilizaremos con un pequeño margen de error las diferentes células encontradas en una muestra fresca.

Objetivos:

• Observar muestras en un microscopio de campo claro y de campo oscuro
• Aprender a contabilizar células a través de un miscroscopio
• Aprender a usar la cámara de Neubauer
• Medir el tamaño de dstintas las células

Materiales y métodos

A.- Campo Oscuro.

Primero se toma una muestra, en este caso un cabello humano, y se prepara para su observación. Para esto se toma un portaobjeto y se pone la muestra en su respectivo lugar, sin agregar ningún solvente o solución. Luego se coloca el cubre objeto, se lleva a la platina para observarla en el microscopio de campo claro con un aumento de objetivo 40X. Una vez que ya se ha observado, estudiado y dibujado, se cambia el microscopio a campo oscuro. Donde se coloca un circulo de cartón negro en la parte inferior del microscopio, sobre la fuente de luz, para que los rayos entren por los bordes del círculo y se divisan las diferencias para luego dibujarlos. Esta actividad se realizo primordialmente para poder evidenciar a través de una muestra de cabello humano la diferencia entre un microscopio de campo claro y uno de campo oscuro

B.- Reglilla

En esta actividad se midió el tamaño celular de glóbulos rojos y glóbulos blancos, usando una reglilla anteriormente calibrada. Para la calibración se usó un portaobjeto con una lámina de vidrio la cual existe una línea graduada de 1mm de largo. Se usa esta línea para darle un valor a la separación entre las rayas de la reglilla según el objetivo que se esté usando. Luego de la calibración se procedió a medir las células de una muestra permanente de frotis de sangre humana, usando los valores obtenidos anteriormente, y hacer un promedio del tamaño celular con las medidas de 5 glóbulos rojos y 5 glóbulos blancos. El objetivo de esta experiencia fue aprender a medir el tamaño de algunas células usando el microscopio.

C.- Determinación del número de células.

En la última actividad se colocó una alicuota de sangre de cordero diluida a 1/500, sobre una cámara de Neubauer, después se procedio (transcurrido 30 segundo) a colocar la cámara de Neubauer al microspcopio. Primero se visualizó la muestra con un objetivo de 4X y posteriormente la misma muestra se observó con un objetivo de 40X. Finalmente con éste último objetivo se contabilizó la cantidad de eritrocitos que poseía la alicuota de sangre diluida, en donde se contabilizó los eritrocitos ubicados en las cuatro esquinas del cuadrado central de la cámara de Neubauer y el cuadrado central del mismo cuadrado central de la cámara. En esta última actvidad la finalidad es aprender a contabizar eritrocitos utlizando  una cámara de Neubauer.

Resultados

[pic 2]

A.- Campo Oscuro

Cabello humano

Tipo de preparación: Temporal

Tipo de colorante: Sin tinción

Aumento objetivo: 40X

Aumento total 400X

Observaciones:

• En el microscopio de campo claro se observó una imagen prácticamente plana, ósea sin relieves, en la cual se pudo ver claramente el tallo y la raíz (4). En el tallo se observó esferas blancas. En la raíz se pudo observar unas especies de hendiduras pequeñas y unas bolsas entre la raíz y el tallo.

• En el microscopio de campo oscuro se pudo observar el borde del objeto con más definición y a la vez con más profundidad. El centro de la muestra se notaba con menos nitidez. La muestra se pudo ver de tonalidades diferentes, los bordes de color rojo y amarillos y a medida que se acerca al centro se iba oscureciendo. [pic 3]

B.-Reglilla

Tabla 1. Cuadro de calibración.

Tabla 2. Tamaño de células (objetivo 40X)

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