MEDIOS SELECTIVOS EN BACTEROLOGIA

PRÁCTICA 7

MEDIOS SELECTIVOS EN BACTEROLOGIA

Uno de los problemas básicos que se presenta en el estudio de los microorganismos es la imposibilidad de trabajar con individuos aislados, por consiguiente, se ha tenido que buscar la manera de lograr, bajo condiciones controladas, el desarrollo de colonias puras del organismo que se desea estudiar. A dichas colonias se les da el nombre común de colonia. Los individuos que la conforman son el resultado de la reproducción clonal que estos microorganismos presentan y por lo tanto son idénticos genética y fenotípicamente.

Para lograr el establecimiento, desarrollo y posterior aislamiento de las bacterias en condiciones de laboratorio, se han diseñado diversos medios nutritivos, los cuales son una mezcla de compuestos orgánicos e inorgánicos que cumplen con los requerimientos indispensables para el buen desarrollo de las bacterias. Así, un medio nutritivo adecuado debe satisfacer las siguientes necesidades:

Fuente de carbono.

Fuente de nitrógeno.

Factores de crecimiento.

Además de los requerimientos anteriores, tanto la temperatura, el pH y la adecuada esterilización de los medios, son factores que determinan el éxito del cultivo de bacterias.

En términos bacteriológicos, llamamos cultivo al crecimiento bacteriano en un medio nutritivo y dependiendo del número de diferentes bacterias cultivadas en un mismo recipiente tenemos:

Cultivos puros o axénicos, sólo un tipo de bacterias.

Cultivos mixtos, varios tipos de bacterias creciendo juntas.

Cultivos bimembres, dos diferentes tipos de bacterias.

En la presente práctica, manejarás algunos medios selectivos. Estos medios, a diferencia de los medios ricos o de propagación como el TG o PY, inhiben el crecimiento de ciertos grupos bacterianos y permiten el desarrollo de otros, esto te permitirá lograr una primera selección de las colonias obtenidas en tus cultivos mixtos, obtenidos en la práctica pasada.

Objetivos

Obtener cultivos "puros" a partir de cultivos " mixtos".

Practicar una nueva técnica en el sembrado de bacterias. Material requerido

Por grupo:

1ó 2 cajas de medio EMB.

1 o 2 cajas de medio TJA

1 ó 2 cajas de medio Lb.

1 ó 2 cajas de medio TCBS agar.

1 ó 2 cajas de medio PA.

· 21

1ó 2 cajas de medio MacConkey.

1 o 2 cajas de medio verde brillante

Cultivos mixtos de la práctica anterior.

Campana de flujo laminar.

Incubadora a 30°C.

Incubadora a 36°C.

Alcohol.

Asas bacteriológicas.

Tubo de ensaye estéril.

Marcador indeleble.

Cinta masking-tape.

Metodología

A partir de los cultivos mixtos, obtenidos en la práctica anterior, recupera en medios selectivos algunas de las colonias con el fin de obtener cepas puras de un determinado género, aquel que deseas analizar durante el curso.

Como se muestra en la tabla 1 de la práctica 6, un mismo género de bacterias puede estar presente en diferentes ambientes, por lo tanto, tienes la posibilidad de buscar el género de tu interés en aquellos cultivos mixtos que te brinden tal posibilidad.

En el siguiente recuadro se presentan los géneros bacterianos sugeridos y se indica el medio selectivo con el cual podrás identificar colonias puras del género de bacteria que buscas.

Género

propuesto: Medio

selectivo:

PYnal

Rhizobium Lb

PA

Pseudomonas PA

Escherichia

Salmonella

Shigella MacConkey

Verde brillante

Klebsiella

Proteus

Vibrio MacConkey

EMB

TCBS

Nota:

...