Microbiologia

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Tema: Hongos Filamentosos del suelo

Objetivo: Aislar y observar hongos filamentosos del suelo mediante técnicas de diluciones y simbra masiva

Procedimiento:

Procedimiento:

Preparación y fijación de frotis

1. Lavar el portaobjetos, secarlo con papel y etiquetarlo.

2. Prender el mechero y esterilizar el asa, esta debe estar al rojo vivo.

3. Dejar enfriar el asa para evitar que los microorganismos sean destruidos.

a. Si es cultivo líquido:

• Acercar el tubo con el cultivo al mechero, quitarle la tapa y flamear la boca del mismo.

• Introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra, evitando topar las paredes del tubo. Tapar el tubo.

• Colocar la muestra en el centro del portaobjetos, extenderla suavemente y de manera uniforme en un área circular de 2 cm aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa.

• Dejar secar el frotis.

b. Si es cultivo sólido:

• Colocar en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada.

• Junto al mechero, levantar ligeramente la tapa de la caja Petri y tomar una pequeña muestra del cultivo con el asa. Tapar la caja.

• Mesclar la muestra de cultivo con la gota que se encuentra en el portaobjetos, extenderla suavemente y de manera uniforme en un área circular de 2 cm aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa.

• Dejar secar el frotis.

4. Cuando los frotis de los cultivos estén completamente secos fijar con calor. Se pasarán las placas, rápidamente, en el interior de la parte amarilla de la llama.

5. Dejar enfriar.

Tinción Gram

1. Añadir 1 ó 2 gotas de cristal violeta a la preparación, hasta que la muestra se cubra por completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.

2. Lavar la placa con el agua de la piseta sobre el fregadero. También se puede usar agua de la llave, evitando que la corriente de agua sea muy fuerte.

3. Agregar 1 ó 2 gotas de solución lugol a la preparación, y dejar actuar 1 minuto. Lavar de la forma indicada en el paso 2.

4. Cuidadosamente, añadir gota a gota el alcohol-acetona lavando la placa durante 10 segundos aproximadamente. Después de este paso NO lavar con agua.

5. Añadir 1 o 2 gotas de safranina para que cubra la muestra y dejar actuar durante 30 segundos. Lavar de la forma indicada en el paso 2.

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