Microbiologia

Análisis microbiológicos

El suelo es un ecosistema que contiene una gran variedad de poblaciones microbianas cuyos miembros representan muchos tipos fisiológicos. Las características químicas, físicas y biológicas de un suelo particular, así como la presencia de crecimiento de plantas influirán en el número y actividades de sus diversos componentes microbianos. Además, a causa de la naturaleza heterogénea del suelo varios tipos fisiológicos de organismos serán encontrados en las proximidades cercanas de uno a otro. La comunidad microbiana en suelos es importante por su relación con la fertilidad del suelo y con los ciclos biogeoquímicos de los elementos, además del uso potencial de los miembros específicos para aplicaciones ambientales e industriales. Por lo que existe la necesidad de conocer, enumerar y aislar los miembros principales y menores de la comunidad microbiana en suelos.

La cuenta viable de microorganismos del suelo puede realizarse por la técnica de cuenta en placa o la técnica del número más probable (NMP).

Los principios fundamentales de estas técnicas son (1) dispersión de una muestra en un diluyente apropiado (solución fisiológica), (2) distribución de una alícuota a un medio apropiado de crecimiento, (3) incubación bajo condiciones óptimas, y (4) conteo de las colonias desarrolladas o lectura de tubos NMP (Germida, 1993).

La composición del medio de crecimiento usado para contar poblaciones microbianas es importante, ya que afectará el resultado final. El medio decrecimiento puede ser selectivo o no selectivo. Los medios selectivos contienen componentes que permiten o favorecen el crecimiento de un grupo determinado de organismos. Los medios no selectivos pueden ser suficientes para el crecimiento de muchos grupos de organismos como sea posible. Para contar un tipo fisiológico específico de microorganismos generalmente es necesario diseñar un medio de cultivo, el cual, cuando es incubado bajo condiciones apropiadas de atmósfera y temperatura, reduce las interferencias de poblaciones no deseadas.

Aunque la cuenta en placa y la técnica del número más probable (NMP) son métodos simples de desarrollar, su utilidad está limitada por un número de factores clave, como la elección del medio, problemas con la dispersión, y aún adsorción de microorganismos a la pared de la pipeta, ya que pueden interferir con la estandarización de estos procedimientos. La consistencia y adecuado uso de muestras réplica ayudan a minimizar algunos de estos problemas.

Microorganismos aerobios

Cuenta de microorganismos viables por dilución en placa

Existen diferentes técnicas para determinar el número de microorganismos en suelos o aguas, tanto directas como indirectas, Para la determinación de microorganismos heterótrofos totales e hidrocarbonoclastas aerobios, se seleccionó la cuenta microbiana por dilución en placa. Es una técnica indirecta de cuantificación; sin embargo, provee una medición de la viabilidad microbiana, permite determinar indirectamente el potencial de biodegradación en un suelo contaminado, es la más adecuada para medios con hidrocarburos como substrato, es rápida de efectuar y no requiere de mucho material

Método

El conteo de poblaciones microbianas por dilución en placa es un método simple y rápido para la cuenta viable de células microbianas en el suelo. Sin embargo, la cuenta obtenida es generalmente 10 a 100 veces menos que aquella determinada por cuenta directa por microscopia.

Las razones para esta discrepancia incluyen la exclusión de la cuenta no viable directamente en el suelo y la inhabilidad para proveer apropiados nutrimentos en el medio de crecimiento, para obtener la cuenta total en placa.

Fundamento

El método de dilución en placa se fundamenta en que cualquier célula viable inoculada en un medio de cultivo se multiplica y produce datos de fácil identificación, como la formación de colonias en placas de agar. Este método consiste en la preparación de una serie de diluciones de una muestra de suelo en un diluyente apropiado, esparciendo una alícuota de una dilución sobre la superficie de un medio de cultivo sólido e incubando la placa de agar bajo condiciones ambientales apropiadas. La dilución debe permitir generar colonias separadas, cada colonia puede proceder de una sola célula o de una agrupación (unidad viable), la cual se contará como una bacteria. Bajo este fundamento, estas placas pueden ser usadas no sólo para el conteo de poblaciones microbianas, sino también para el aislamiento de organismos.

Un medio selectivo o no selectivo puede ser usado dependiendo de la naturaleza del microorganismo que se desea contar o aislar

AGAR ROSA DE BENGALA

DATOS GENERALES

Nombre completo Agar Rosa de Bengala

Consistencia sólido

Tipo de medio diferencial

Campos

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