Microscopia y niveles de organizacion

                               Informe de Laboratorio

Título del trabajo Práctico: Microscopia y niveles de organización

Asignatura: Laboratorio Principios de la Biología

Introducción y objetivos

Todos los seres vivientes están constituidos por células, unicelulares (una sola célula conforma el organismo) y pluricelulares (compuesto por muchas células que se han organizado para constituir un organismo).

Sin duda, el elemento más importante para el estudio de la morfología celular es el microscopio, el cual se inventó entre los años 1550 y 1590 (algunos dicen que lo invento Giovanni Farber en 1550, mientras que otros opinan que lo hizo  Zaccharias Jannsen cerca de  1590). Robert Hooke fue el primero en utilizar la palabra "célula", cuando en 1665 hacía observaciones microscópicas de un trozo de corcho. Hooke no observó células tal y como las conocemos actualmente, él observó que el corcho estaba formado por una serie de celdillas, ordenadas de manera semejante a las celdas de una colmena; para referirse a cada una de estas celdas, el utiliza la palabra célula.(1) 

El descubrimiento de la célula se encuentra estrechamente relacionado con el desarrollo de los primeros microscopios, ya que es una estructura cuyo tamaño escapa al  poder de resolución del ojo humano, que aproximadamente es menor a una décima de milímetro. Dentro de los  tipos de microscopios, el más utilizado es el microscopio óptico, que utiliza la luz visible para crear una imagen aumentada del  objeto observado.

 En la mayoría de los casos, las células no solo son diminutas, sino que también transparentes. Debido a esto, los principales descubrimientos sobre la estructura interna de las células  dependieron del hallazgo, a fines del siglo XIX, de diversas técnicas de preparación de los materiales  mediante fijación, corte y tinción, que proporcionaron  el contraste suficiente para hacerlas visibles

Al respecto, la tinción ha permitido mejorar la observación de las diferentes estructuras celulares al contrastar selectivamente moléculas. Existen diferentes colorantes, los cuales se utilizan de acuerdo a la afinidad  química de estos con los diferentes componentes celulares. Uno de estos es el azul de metileno un colorante catiónico que  se combina con moléculas cargadas negativamente, como el núcleo y pared celular.

El microscopio óptico está formado por dos sistemas.

- El sistema mecánico, que le da soporte y estructura al microscopio. Los elementos básicos que lo componen son el pie, que soporta el microscopio, la columna, donde se apoyan las piezas restantes, el tubo, que es el elemento de unión entre el ocular y el revólver, pieza giratoria que contiene los objetivos, la platina, sobre la que se apoya la preparación a observar, y los tornillos micrométricos y macrometricos que se utilizan para enfocar la preparación (Macrometrico  se usa para ajustes  gruesos y el micrométrico para el ajuste fino o de precisión). Figura 1 (ver anexo )

-El sistema óptico que permite la formación de la imagen; está formado por:

Dos sistemas de lentes que amplifican la imagen del objeto.

• Lentes objetivos: los lentes de 4x, 10x, 40x reciben el nombre de objetivos secos y el de 100x, objetivo de inmersión, debido a que en los primeros no se utiliza un medio entre la muestra y el lente, solo hay aire , pero en 100x se coloca aceite de inmersión . Figura 2 (ver anexo )
• Lentes oculares, se encuentran en la parte superior del tubo , por lo general tienen un aumento de 8x, 10x ó 12x

Condensador, concentra la luz sobre la preparación y permite regular su intensidad,  Diafragma o iris, permite regular la luz que sale de este, anillo porta filtro, permite adicionar un filtro de color al condensador para destacar estructuras de interés en la preparación . Figura 3 (ver anexo)

El objetivo de este trabajo es  aprender a realizar  una observación utilizando el microscopio óptico  compuesto. Así como también  reconocer diferencias entre células procariontes y eucariontes. (2)

Procedimiento experimental

En primera instancia se prepara el microscopio para poder ser utilizado de una manera adecuada evitando daños.  Colocando primeramente este en una posición cómoda sobre una superficie plana, siempre tomándolo del  brazo o columna, jamás arrastrándolo.  Se chequeo la limpieza de los diferentes lentes antes de comenzar la observación, se limpiaron con solución limpiadora de microscopio y pañuelos desechables. Al haber terminado se encendió la lámpara, se bajó el condensador y se abrió el diafragma completamente.

1. Muestra de letras: Se colocan los lentes objetivos en el menor aumento 4X (banda color rojo) luego  la muestra de letras impresas en el  eje central de la luz, con el diafragma se regula la entrada de la luz, con el condensador se regula la intensidad de la luz acercando y alejando  la muestra. Se comienza a subir el tornillo macrométrico hasta poder ver la imagen y luego con el tornillo micrométrico hasta poder enfocar  la muestra correctamente. Cuando ya se logró obtener la imagen se giró el revolver hasta llegar al lente 10X (banda color amarillo) cuando ya se logra tener el objetivo se anotan los datos obtenidos y se vuelve a los lentes objetivos de menos aumento 4X (banda color rojo).

1. Microscopia célula eucariota vegetal: Epidermis de cebolla con tinción. Se utiliza una hoja de bisturí para extraer un trozo pequeño de la epidermis de la cebolla. Se coloca en un portaobjeto limpio, se le añadió 2 gotas de azul de metileno  dejando actuar por 2 a 3 minutos. Se cubre la muestra con un cubreobjetos limpio. Cuando ya se terminó el proceso anteriormente comentado se procede a limpiar los lentes objetivos del microscopio, se coloca la muestra en el eje central de la luz , se regula la entrada de la luz con el diafragma , con el condensador se regula la intensidad de la luz acercando y alejando la muestra. Se comienza a subir el tornillo macrométrico hasta poder ver la imagen y luego con el tornillo micrométrico hasta poder enfocar  la muestra correctamente. Cuando ya se logró obtener la imagen se giró el revolver hasta llegar al lente 10X (banda color amarillo) así mismo con el lente 40X (banda color azul).Cuando ya se logra tener el objetivo se anotan los datos obtenidos y se vuelve a los lentes objetivos de menos aumento 4X (banda color rojo).

1. Microscopia célula eucariota animal: células descamativas de mucosa bucal con tinción.

Con una torula se raspa suavemente la cara interna de la mejilla, se coloca una gota de agua destilada sobre un portaobjeto depositando en este el producto obtenido de la torula, extendiéndolo con precaución. Luego se le agregan 2 gotas de azul de metileno y se deja actuar por 2 a 3 minutos. Se coloca un cubreobjetos limpio dejando caer suavemente sobre la muestra  del portaobjeto  evitando que queden burbujas de aire entre el portaobjeto y el cubreobjeto.  Luego de esto se  procede a limpiar los lentes objetivos del microscopio, se coloca la muestra en el eje central de la luz, se regula la entrada de la luz con el diafragma, con el condensador se regula la intensidad de la luz acercando y alejando la muestra. Se comienza a subir el tornillo macrométrico hasta poder ver la imagen y luego con el tornillo micrométrico hasta poder enfocar  la muestra correctamente. Cuando ya se logró obtener la imagen se giró el revolver hasta llegar al lente 10X (banda color amarillo) así mismo con el lente 40X (banda color azul).Cuando ya se logra tener el objetivo se anotan los datos obtenidos y se vuelve a los lentes objetivos de menos aumento 4X (banda color rojo).

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