Muestras De ADN En Gel De Agarosa

METODO1:

Se tapó los extremos de la bandeja y se coloca sobre una superficie plana y horizontal se preparó TBE al 0.5 para llenar el tanque electroforético este fue el mismo con el cual se preparó el gel, se llevó a ebullición la agarosa y se le coloco el peine y se dejó enfriar a temperatura ambiental. Luego se quito el peite y de sumergió en el tanque electroforético, se agregó TBE hasta cubrir el gel se preparo la muestra de ADN y se insertó en los pocillos usando una micropipeta y en los extremos se colocaron marcadores de peso moleculary de concentración.Se conecto el tanque electroforético de manera que el ADN migrara la energía se aplico por 30min. Despues se sumergió el gel en bromuro de etidio ,se procedió a sacar elgel de la bandeja y se observo con el transiluminador de UV.

METODO 2:

La solución de gel de agarosa se mezcla con 0,5 microgramos por mililitro de bromuro de etidio, un compuesto que se intercala en el ADN y permite que los fragmentos se vean en el gel. La solución se vierte en un molde para gel que puede tener los extremos abiertos, los cuales deben sellarse con una cinta adhesiva o clips de ajuste para prevenir que la solución se escape. Un peine de gel es una herramienta utilizada para insertar pocillos para las muestras en las calles del gel. Uno o más de estos pueden colocarse en el gel para crear estos pocillos para muestras. Se deja enfriar la solución hasta que solidifique, lo que puede variar entre unos pocos minutos y varias horas, con un alto porcentaje de geles (aquellos menos diluidos) que enfrían más rápido. Un truco común es poner el gel en el refrigerador y luego permitirle alcanzar la temperatura ambiente antes de usarlo. Una vez preparado, el gel se usa lo más pronto posible o se envuelve en film transparente para evitar que se seque. Una vez listo, el gel es preparado removiendo la cinta o clips de los extremos abiertos que es esencial para permitir el flujo de corriente eléctrica. El gel es removido gentilmente y toda la bandeja es sumergida dentro de la cuba electroforética, conteniendo suficiente solución tampón de electroforesis para cubrir la superficie completa del gel, prevenir que el gel se seque y que cortocircuitos interfieran. Las muestras de ADN son diluidas con una solución tampón coloreada de carga que también ancla el ADN al pocillo. Estas se preparan en un volumen tan pequeño como sea posible para satisfacer el volumen permitido por los pocillos creados en el gel. Luego, las muestras se cargan cuidadosamente en cada pocillo para asegurar que no ocurra contaminación cruzada de las muestras. También se incluye un marcador apropiado en uno de los pocillos para orientar al usuario en el tamaño de los fragmentos de ADN. El aparato de electroforesis es preparado verificando que los cables estén orientados en la dirección correcta de la cuba, para que las muestras corran del extremo negativo (cátodo) al positivo (ánodo)

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