“OBSERVACIÓN DE BACTERIAS Y HONGOS”

Práctica N° 1

1. TITULO: “OBSERVACIÓN DE BACTERIAS Y HONGOS”

Datos de la escuela profesional: Ingeniería Ambiental

Asignatura: Biología

Datos del docente: Gina Tito Tolentino

Fecha: 07/06/2022

Datos del estudiante: Aner Efrid Chiclayo Chavez

1. Fundamento teórico:

Las bacterias son microrganismos que tienen distintas formas. Son seres unicelulares que pueden vivir en cualquier ecosistema terrestre. Además, son muy importantes para estos. Es realmente asombroso, porque pueden vivir en condiciones extremas de presión y temperatura. El cuerpo humano está constituido por muchas bacterias, se calcula que hay mas bacterias que células. La mayoría de estas no producen enfermedades en el cuerpo, porque algunas son beneficiosas. Es muy poca la cantidad de especies que causan daños en nuestro cuerpo. Los microorganismos muestras diferencias físicas y químicas entre ellos. Esto nos indica a que pueden reaccionar diferencialmente ante un procedimiento de tinción. Las tinciones diferenciales son de las más utilizadas en el área de Microbiología por las amplias aplicaciones que posee para la salud. Este tipo de tinción es cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante y sirven para poner de manifesto las características de afinidad por ciertos colorantes de microorganismos. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción. (González Meléndez, Elizalde Cuevas, Cortés Cruz, & Orduña Sánchez, 2020) En particular, tenemos a la tinción Gram, la técnica más utilizada para diferencias de los dos grupos de bacterias: Gram positivas y Gram negativas.

El siguiente diagrama ilustra las diferencias en la estructura de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. Las dos características clave que conducen a las diferentes propiedades de visualización de las especies Gram positivas y Gram negativas son el grosor de la capa de peptidoglicano y la presencia o ausencia de la membrana lipídica externa. Esto se debe a que la estructura de la pared afecta la capacidad de la célula para retener la mancha violeta cristalina utilizada en el procedimiento de tinción de Gram que luego se puede visualizar bajo un microscopio de luz. (Steward, 2019)

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Las bacterias Gram negativas presentan una capa delgada de peptidoglicano y además una membrana lipídica externa. En cambio, las Gram positivas, llevan una capa gruesa de peptidoglicano y no presentan ninguna membrana lipídica externa. Así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales. (Corrales Ramírez & Caycedo Lozano, 2019)

La tinción de Gram requiere de cuatro soluciones: Un colorante básico, Un mordiente, un agente decolorante y un contraste (otro colorante básico). En resumen: Lo primero es teñir la preparación con un colorante básico, de preferencia el cristal violeta. Luego, por un tratamiento de células teñidas con un mordiente. Entonces, es el momento de que la preparación sea con un agente decolorante como el alcohol acetona. Finalmente, las células que ha retenido el colorante después de la decoloración son las Gram positivas, y si no, son llamadas Gram negativas.

1. Objetivo:

Identificar el color de la bacteria dada en el laboratorio mediante la técnica de tinción diferencial Gram.

1. Método:

1. Inunda suavemente la mancha con cristal violeta y déjalo durante 1 minuto. Incline ligeramente el tobogán y enjuague suavemente con agua del grifo o agua destilada. (Steward, 2019)

2. Inunda suavemente el frotis con yodo de Gram y déjalo durante 1 minuto. Incline ligeramente el tobogán y enjuague suavemente con agua del grifo o agua destilada. El frotis ahora aparecerá púrpura. (Steward, 2019)

3. Decolorar el frotis con alcohol etílico al 95% o acetona. Incline ligeramente el tobogán y aplique el alcohol gota a gota hasta que el alcohol corra casi claro (5-10 segundos). Enjuague inmediatamente con agua para evitar la decoloración excesiva. (Steward, 2019)

4. Inunda suavemente con safranina contramanten y deja actuar durante 45 segundos. Incline ligeramente el tobogán y enjuague suavemente con agua del grifo o agua destilada. (Steward, 2019)

5. Seque la diapositiva en papel de filtro y luego vea el frotis con un microscopio de luz bajo inmersión en aceite. (Steward, 2019)

1. Conclusiones:

De la muestra DC DAN dada en el laboratorio, se logró identificar el color púrpura predominante en ella, después de realizar todo el procedimiento de tinción de Gram. Concluyendo que esta muestra pertenece al grupo de las bacterias Gram Positivas.  

1. Cuestionario:

1. ¿Bajo qué circunstancia la tinción diferencial de Gram podría resultar errada?

Sabemos lo factible que es la tinción Gram, por ende, este método debe llevarse con mucha responsabilidad, porque al más mínimo error que se cometa la reacción puede variar. Algunos aspectos pueden ser la edad de las células y el tiempo prolongado para decolorar la muestra, teniendo como resultado que las bacterias Gram positiva se pinten como Gram Negativas. Por ello, es importante que se controle todo aquello que parece irrelevante.

2. Que efecto traería reemplazar el lugol con otro agente oxidante.

No traería efecto alguno, porque el lugol es un agente oxidante, entonces, se produciría el mismo efecto en la bacteria al ser reemplazado.

3. ¿Podría usted variar el colorante primario y el contraste obteniendo los mismos resultados?

No lo puedo variar, porque el cristal violeta tiñe a las bacterias de color morado. Si se modifica este procedimiento, se obtendría otra forma a la tinción Gram. No se podría observar el color para poder diferenciar del otro grupo.

4. ¿Cuál es la influencia del pH? en la reacción Gram?

El PH es de suma importancia en la tinción de Gram, porque si es demasiada su acidez las grampositivas se pueden volver gramnegativas. Así como, las gramnegativas pueden cambiar a gramnegativos por el aumento de alcalinidad.

5. Liste cinco ejemplos de bacterias Gram positivas y cinco de Gram negativas, señalando su importancia.

Bacterias Gram positivas:

Staphylococcus spp

Los estafilococos son bacterias Gram positivas. El principal representante de este género es Staphylococcus aureus, el cual se puede encontrar como microbiota normal en el cuerpo humano, especialmente en el tracto respiratorio superior; no obstante, S. aureus puede afectar cualquier órgano y producir gran cantidad de infecciones, de las cuales las más importantes son la bacteremia, la neumonía y la endocarditis, ya sean asociadas al cuidado de la salud o adquiridas en la comunidad. (Jiménez Tobón & Vélez Hoyos, 2012)

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