PRÁCTICA 3. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

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PRÁCTICA 3. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Autora: Quiñonez Hernández Jennifer Alejandra
Laboratorio de Química Orgánica, Facultad de Ciencias, UNAM
Fecha de entrega: 26 de octubre de 2020

INTRODUCCIÓN
Sabemos que para llevar a cabo la separación de mezclas existen diferentes métodos, los cuales varían dependiendo la mezcla en cuestión que se necesite y quiera separar. En esta ocasión y para esta práctica la ténica de separación que nos interesa en la cromatografía en columna, es necesario saber en qué consiste, cómo se lleva a cabo, los aspectos que se toman en cuenta para realizarla, ya sean propiedades físicas o químicas de las sustancias que se encuentren en la mezcla a separar. Llevaremos a cabo la práctica en un simulador que nos permitirá entender la técnica.
Definimos entonces la cromatografía en columna como un método físico de separación en el que los componentes a separar son distribuidos entre dos fases, una de las cuales permanece estacionaria mientras que la otra se mueve en una dirección determianda esto quiere decir que el proceso de separación por cromatografía en columna podemos distinguir dos fases:
Fase móvil: esta puede ser un líquido o un gas en el que va disuelta la muestra.
Fase estacionaria: esta se mantiene fija sobre una columna o superficie sólida.
Es decir, la fase estacionaria se coloca en el interior de una columna de vidrio la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias que pasan a través de la columna, posteriormente la fase estacionaria se impregna con la fase móvil, finalmente agregamos la mezcla que deseamos separar en la parte superior de la fase estacionaria y la fase móvil pasará a través de ellas. Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, irán saliendo de la columna y se irán recogiendo en fracciones. Las fracciones menos polares serán las primeras en salir de la columna. En cambio, las sustancias más polares, quedan retenidas por más tiempo en él.
Los componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven con mayor lentitud en la fase móvil, mientras que aquellos que se unen débilmente a la fase estacionaria se mueven con mayor rapidez. Esta diferencia de velocidades en el seno de la fase móvil permite la separación y el análisis cualitativo o cuantitativo de los componentes.
El absorbente mayormente utilizado para las cromatografías en columna, es el gel de sílice. La cromatografía en columna puede realizarse por gravedad o a media presión. Cuando se realiza a media presión, se conecta la cabeza de la columna a un compresor o a una línea de aire comprimido.
Existen varias métodos de cromatografía en columna según la forma de contacto entre la fase móvil y la fase estacionaria, los cuales son los siguientes:
Cromatografía en columna: La fase estacionaria se introduce en una columna estrecha a través de la cual pasa la FM por efecto de la gravedad o de una presión aplicada.
Cromatografía plana: La fase estacionaria se fija sobre una placa plana y la fase móvil se desplaza a través de la fase estacionaria por capilaridad o por gravedad.
Estos métodos también se pueden clasificar según el estado físico de la fase móvil en:
Cromatografía de líquidos: La fase móvil es un líquido. Podemos identificar las siguientes;
1. Cromatografía líquido-líquido o de reparto: la fase estacionaria es un líquido.
2. Cromatografía líquido-sólido o de adsorción: la fase estacionaria es un sólido.
3. Cromatografía de intercambio iónico: la fase estacionaria es una resina intercambiadora de iones.
4.Cromatografía de exclusión por tamaño: la fase estacionaria es un líquido en los intersticios de un sólido polimérico.
5. Cromatografía de afinidad: la fase estacionaria es un grupo de líquidos específicos unidos a una superficie sólida.
Cromatografía de gases: La fase móvil es un gas, esta a su vez se clasifica en:
1. Cromatografía de gas-líquido: la fase estacionaria es un líquido absorbido o unido a una superficie sólida.
2. Cromatografía gas-sólido: la fase estacionaria es un sólido.
Cromatograf+ia de fluidos supercríticos: la fase móvil es un fluido supercrítico, mientras que la fase estacionaria está compuesta por moléculas orgánicas enlazadas a una superficie sólida.

OBJETIVOS
1. Conocer en qué consiste la cromatografía en columna, identificar el proceso dentro otros métodos de separación de mezcla, así como los aspectos de la mezcla que toma en cuenta para poderse llevar a cabo.
2.  Lograr identificar qué tipo de mezcla se pueden separar con mayor facilidad con esta técnica.
3. Conocer la utilidad que tiene esta técnica en el área de la Biología.

PREGUNTAS DE ENGANCHE
1. ¿Cómo es la separación de los componentes de una mezcla en la cromatografía en columna? Indica cuáles componentes eluyen al inicio y al final.
Los compuestos con interacciones fuertes con la fase estacionaria se moverán más lentamente que los compuestos con interacciones débiles con la fase estacionaria. Por lo tanto, los compuestos con interacciones débiles saldrán de la columna, o eluirán, primero que aquellos con interacciones fuertes.

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