PRÁCTICA No. .....- (DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESÓFILOS. MÉTODO: SIEMBRA POR EXTENSIÓN EN SUPERFICIE)

FACULTAD: (CIENCIAS)

CARRERA: (BIOQUÍMICA Y FARMACIA)

GUÍA DE LABORATORIO DE (MICROBIOLOGÍA APLICADA)

PARALELO: QUINTO A

PRÁCTICA No. …..- (DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESÓFILOS. MÉTODO: SIEMBRA POR EXTENSIÓN EN SUPERFICIE)

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: (estudiante(s)                        CODIGO(S): (de estudiante(s)

        ……………………………………                ………………………………….

        ……………………………………                ………………………………….

GRUPO No.: ………….

FECHA DE REALIZACIÓN:                         FECHA DE ENTREGA:

                                                        dd/mm/aa

El método de siembra por extensión en superficie presenta ventajas y desventajas con relación al método de vertido en placa.

VENTAJAS

• El medio no necesariamente debe ser translúcido
• El aspecto de las colonias se observa fácilmente porque estas se desarrollan en la superficie del medio.
• Los microorganismos termosensibles no se inactivan como puede ocurrir en el método de vertido en placa al mezclarse el inóculo con el agar fundido a 45° C.  
• Se pueden hacer estudios in situ.

INCONVENIENTES

• El alimento suspendido puede tener un efecto inhibidor sobre los microorganismos, debido a que se utiliza un pequeño volumen de muestra.
• En las diluciones más bajas puede ocurrir confusión óptica entre partículas de alimentos y pequeñas colonias.
• Con muestras de pocos microorganismos no da resultados satisfactorios .
• No se recomienda para muestras en las que se sospeche que el número de organismos mesófilos va a ser inferior a 3000/g.

1. OBJETIVO:

El recuento de aerobios mesófilos por el método de siembra por extensión en superficie permite determinar el nivel de este grupo microbiano que es indicador de higiene, a través de la recuperación de esta microbiota en la superficie de una placa de PCA cuando ésta se inocula con alícuotas de diluciones de la muestra y se incuba a 30°C durante 48 horas.

Este método no es muy exacto pero es útil para conocer estimados aproximados de números de bacterias por ej. chequeos en la línea de procesamiento de una planta.

1. INSTRUCCIONES

• Adicionar a cada placa de Petri 15-18 mL. de medio para recuento en placa (PCA) fundido y enfriado a 45 - 55 °C. Dejar solidificar.
• Secar las placas preferiblemente dejándolas invertidas a temperatura ambiente durante 8 horas o calentando en una estufa a 50°C durante 1.5 -2 horas.
• Si se preparan con anterioridad, no se deben guardar más de 24 horas a temperatura ambiente ó de 7 días en refrigeración a 2 - 5 °C.
• Preparar la muestra de alimento.
• Transferir 2 alícuotas de 0.1 de las diluciones escogidas y depositarlas en 2 placas de Petri respectivamente.
• Extender las alícuotas de 0.1 mL sobre las superficies del medio tan rápido como sea posible.  Utilizar las espátulas de Driglasky. Dejar secar las superficies de las placas durante 15 minutos.
• Incubar las placas invertidas durante 3 días a 31°C
• Calcular el número de microorganismos aerobios mesófilos por gramo o mililitro de muestra según lo señalado en las normas.

Cálculos para obtener el resultado

C = n x 10 x f

donde,

C   =  UFC de microorganismos aerobios mesófilos/g ó mL.

n    =  Número de UFC contadas en la placa Petri

10  =  Factor para convertir el inóculo sembrado a 1 mL.

f     =  Factor de dilución.  

1. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

• Preparación del material de vidrio, esto es limpieza y esterilización de materiales que van a usar todos los equipos de trabajo.
• Preparación, esterilización, dispensación, rotulación y almacenamiento adecuado de los medios de cultivo a emplear. Las placas de PCA deben prepararse con anticipación y las superficies deben estar secas.
• Preparación de muestras en el laboratorio
• Preparación del homogeneizado y el sistema de diluciones sucesivas de orden 10
• Simultáneamente a la preparación de las diluciones se inoculan las placas de agar que tienen la superficie seca
• Incubación de las placas
• Observación de las placas Petri para contar las colonias
• Desarrollo de cálculos para conocer la microbiota presente por g o mL de alimento o superficie contaminada.
• Análisis e interpretación de resultados
• Observaciones

1. RESULTADOS OBTENIDOS

Luego del período de incubación se obtendrán placas de PCA con colonias distribuidas en toda la superficie del medio de cultivo translúcido. No hay colonias en el fondo ni en la interfase de las placas. El número de colonias mantiene relación con las diluciones sembradas.

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