PRÁCTICA 1 MICROSCOPIA PRINCIPIOS TEÓRICOS DE LA PRÁCTICA

PRACTICARIO DE LICENCIATURA EN FISIOTERAPIA

PRÁCTICA 1

MICROSCOPIA

APLICACIÓN: SEMANA 3

OBJETIVO GENERAL

• Conocer la estructura y manejo del microscopio óptico

 OBJETIVO(S) ESPECÍFICO(S)

• Identificar las estructuras y su funcionamiento del microscopio óptico.
• Adquirir destreza en el manejo del microscopio óptico aplicando ensayos ficticios y prácticos.

PRINCIPIOS TEÓRICOS DE LA PRÁCTICA

Históricamente el microscopio fue el primero que permitió revelar los secretos de la estructura celular y todavía hoy continúa siendo un instrumento valioso en biología celular. Hans y Zacharias Jansen, alrededor de 1595, pprodujeron tanto el microscopio simple (un sólo lente) como el microscopio compuesto (dos lentes). Hoy en día se cuenta con una variedad de ellos como el Microscopio óptico el más común y considerado el primero en inventarse, hasta desarrollarse otros más sofisticados como el M. electrónico, el M. electrónico de barrido, el M. de fuerza atómica, el M. de fluorescencia entre otros.

En el Microscopio óptico es importante conocer que el aumento y poder de resolución (poder distinguir dos objetos que están juntos) determinan la capacidad de observar la muestra estudiada y para ello se tiene que al primer juego de lentes que está cercano a la muestra en estudio se le conoce como el objetivo, que puede ser de 4x, 10x, 40x o 100x y el segundo juego de lentes cercano al ojo del observador se denomina ocular. Precisamente al objetivo señalado con la letra x indica la capacidad de aumento que tiene, 10x significa que la imagen está aumentada 10 veces de su tamaño normal. Cabe destacar que el microscopio óptico es útil para observar objetos que se hallen fuera del límite de resolución del ojo humano, así tenemos que estructuras como los cromosomas y bacterias intestinales se pueden observar con objetivos a partir de 40x, moho del pan a partir de 4x. Caso contrario la grana de cloroplasto, virus de la gripe, ribosomas es imposible observarlos con este tipo de microscopio y es conveniente destacar que existen dos tipos de objetivos los de observación en seco y los de inmersión, en el primero el aumento varía de 4x a 40x en el segundo caso el lente de inmersión es de 100x el cual para lograr visualizar la imagen con mayor detalle se utiliza aceite de cedro o sintético en el cual es sumergido el lente derivando de ahí el nombre de inmersión.

Las ventajas que presenta el uso del microscopio óptico es que se pueden observar células vivas y enteras, los inconvenientes es que los análisis no pueden ser muy detallados y a profundidad, la unidad de medida es el micrómetro (µm). El ojo humano sólo puede distinguir dos puntos separados por más de o.1 mm o 100 micrómetros (µm), la mayoría de las células son mucho más pequeñas y se necesita del microscopio óptico cuyo límite de resolución es de 0.2 µm. Para estructuras más pequeñas, que midan entre 0.4 y 200 nanómetros (nm) se requiere del microscopio electrónico.

EQUIPO NECESARIO

Cada equipo requiere:

• 1 microscopio
•  3 portaobjetos
• 3 cubreobjetos
• 2 laminillas con preparación histológica
• 1 hisopo

MATERIALES PARA LA PRÁCTICA

• 5 ml de Etanol-éter para limpieza de objetivos
• Papel para limpieza de objetivos
• 1 frasco con gotero con solución de azul de metileno
•  1 gotero con agua destilada

Material provisto por el alumno

• 1 hoja de papel periódico
• 20 ml de agua estancada

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA

Sección I

1. El profesor explicará las partes y función del microscopio (referenciarse a anexo I)
2. Con base en el esquema, cada alumno procederá a identificar cada una de las partes del microscopio señaladas con las líneas.

[pic 2]

1. Posteriormente, se procederá a explicar los cuidados que se deben de considerar respecto al manejo del microscopio (referenciarse a anexo III)
2. Una vez terminada la actividad de manejo, se realizará el montaje de una preparación ficticia:

• cortar un trozo de 1 cm de la hoja del periódico en el que se encuentre alguna letra
• colocar un par de gotas en el centro del portaobjetos y colocar sobre las gotas el trozo de periódico evitando que se arrugue
• colocar el cubreobjetos sobre la muestra cuidando que no se formen burbujas

1. Observación de la preparación (enfoque del microscopio): colocar el portaobjetos sobre la platina sujetándola con las pinzas y observar que la letra este derecha
2. Elegir el objetivo de menor aumento girando el revolver
3. Enseguida y sin utilizar el ocular girar el macrométrico para subir la platina lo más cercano que se pueda pero sin que llegue a tocar la preparación el objetivo
4. Observando por el ocular, mover el mismo tornillo MUY DESPACIO y en sentido contrario hasta obtener una visión clara de la muestra
5. Una vez realizado este enfoque, utilizar el tornillo micrométrico para un ajuste perfecto del enfoque (Contestar las preguntas del anexo IV)

Durante esta fase de la práctica, completa la siguiente información:

1. Con objetivo de 10x mover la preparación hacia la derecha, ¿hacia dónde se mueve la letra?________ y si se mueve la preparación hacia la izquierda ¿hacia dónde se mueve la letra?________
2. Este fenómeno se observa moviendo hacia adelante y atrás la platina
3. Girar el revólver para cambiar a un objetivo de 40x, ajustar el enfoque con el micrómetro
4. Cambia la letra de reposición con respecto a la visión con el objetivo anterior?_________ Por consiguiente “LA IMAGEN AL MICROSCOPIO ÓPTICO SIEMPRE SE VE ______________”
5. Con este segundo objetivo ¿se ve la letra entera o por el contrario se ve parte de ella?____________ En este caso ¿cómo es como es el área de observación mayor o menor?_________ Por lo anterior se puede decir a mayor aumento la imagen se ve _____________ pero el campo visual es ___________

Sección II

1. Con las preparaciones histológicas proporcionadas en el laboratorio seguir los siguientes pasos
2. Para su observación de la laminilla (enfoque del microscopio): colocarla sobre la platina sujetándola con las pinzas y verificar que la laminilla este bien sujetada
3. Elegir el objetivo de menor aumento girando el revolver
4. Enseguida y sin utilizar el ocular girar el macrométrico para subir la platina lo más cercano que se pueda pero sin que llegue a tocar la preparación el objetivo
5. Observando por el ocular, mover el mismo tornillo MUY DESPACIO y en sentido contrario hasta obtener una visión clara de la muestra
6. Una vez realizado este enfoque, utilizar el tornillo micrométrico para un ajuste perfecto del enfoque (dibujar lo observado)
7. Con la preparación de agua estancada, colocar 3 gotas de agua estancada en un portaobjetos y colocar el cubreobjetos
8. Para la observación de la preparación (enfoque del microscopio): colocar el portaobjetos sobre la platina sujetándola con las pinzas y verificar que la laminilla este bien sujetada
9. Elegir el objetivo de menor aumento girando el revolver
10. Enseguida y sin utilizar el ocular girar el macrométrico para subir la platina lo más cercano que se pueda pero sin que llegue a tocar la preparación el objetivo
11. Observando por el ocular, mover el mismo tornillo MUY DESPACIO y en sentido contrario hasta obtener una visión clara de la muestra
12. Una vez realizado este enfoque, utilizar el tornillo micrométrico para un ajuste perfecto del enfoque (dibujar lo observado)

Sección III

1. Con la preparación de un exudado de la mejilla de algún compañero colocarlo en un portaobjetos y agregar 0.5 ml de azul de metileno, colocar el cubreobjetos
2. Para la observación de la preparación (enfoque del microscopio): colocar el portaobjetos sobre la platina sujetándola con las pinzas y verificar que este bien sujeta
3. Elegir el objetivo de menor aumento girando el revolver
4. Enseguida y sin utilizar el ocular girar el macrométrico para subir la platina lo más cercano que se pueda pero sin que llegue a tocar la preparación el objetivo
5. Observando por el ocular, mover el mismo tornillo MUY DESPACIO y en sentido contrario hasta obtener una visión clara de la muestra
6.  Una vez realizado este enfoque, utilizar el tornillo micrométrico para un ajuste perfecto del enfoque (dibujar lo que se observa y explicarlo)

ACTIVIDADES Y REPORTES DE LA PRÁCTICA

Resolver el cuestionario e incluirlo en el reporte

1. ¿Cuáles son las características de un Microscopio óptico, M. simple, M. Compuesto, M. de fluorescencia, M. de Barrido?

2. ¿Cuál es el rango de tamaño de las bacterias y en qué unidades se miden?

...