Parte II. Purificación Por Cromatografía De Intercambio iónico Y De Afinidad.

Cuestionario

1. ¿Porqué es necesario llevar acabo el proceso de desalado de la o las fracciones con alto contenido de sal en protocolo experimental antes de someterla a cromatografía de afinidad o de intercambio iónico?

Es necesario, porque al pasar por el proceso de desalado se retienen las sales y dejan salir las proteínas

2. ¿Cuáles otros usos tiene la cromatografía de exclusión molecular que no sea la de ayudar a desalar una suspensión de proteínas?

Eliminación de fenol de las preparaciones de ácidos nucleicos; eliminación de compuestos de bajo peso molecular marcados; eliminación de productos, cofactores, inhibidores, etc de las enzimas y purificación de macromoléculas.

3. ¿Qué intervalo de fraccionamiento de moléculas tiene el Sephadex-G25 y que aplicaciones tiene?

El Sephadex G-25 tiene un intervalo de fraccionamiento para proteínas de 1000 a 5000 Dalton.

4. ¿Qué es el volumen vacío en una columna de filtración en gel?

Es el volumen del disolvente del espacio que rodea a las moléculas

5. ¿A qué se refiere el término volumen muerto en una columna cromatográfica?

Volumen de fase móvil que se requiere para eluir una especie no retenida.

6. Investiga la composición de la matriz de intercambio iónico que se usó para purificar a la LDH.

7. De acuerdo con pI de la LDH, si contaras con una columna de intercambio aniónico 
como DEAE-celulosa, ¿a qué pH mantendrías a tu proteína y a qué pH mantendrías el 
amortiguador para eluir a la proteína de la columna? Fundamenta tu respuesta.

La cromatografía de intercambio iónico se fundamenta en las propiedades ácido-base de las proteínas. Una proteína a pH menor de su punto isoeléctrico tendrá carga positiva y a pH mayor de su punto isoelétrico presentará carga negativa. Entonces tomando en cuenta de que se trata de una columna de DEAE-celulosa y es una resina con carga positiva mantendremos a la proteína con un pH mayor a su punto isoeléctrico. El pH del amortiguador

8. ¿Qué propiedad de la proteína se utiliza para purificar a la proteína mediante una 
columna de intercambio catiónico?

La propiedad principal es la carga que posea la proteína.

9. ¿Qué debe contener el eluyente para la purificación de la LDH en la cromatografía de 
intercambio iónico que se propone en este protocolo y por qué?

Debe tener cierto pH y fuerza ionica

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