Práctica. Determinación de urea, creatinina y ácido úrico

PRÁCTICA 7 

DETERMINACIÓN DE UREA, CREATININA Y ACIDO URICO.

UNIDAD V: Compuestos nitrogenados y su metabolismo.

OBJETIVOS 

Objetivo general 

1. Determinación cuantitativa de urea, creatinina y ácido úrico en suero humano mediante el empleo de kits de diagnóstico clínico.

Objetivos específicos

1. Realiza el diagnóstico clínico de las muestras sanguíneas procesadas a través del análisis de los resultados obtenidos.

RESULTADOS 

Tabla 1. Datos de Paciente 

Tabla 2. Resultados de la determinación de urea

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Figura 1. Grafica de la absorbancia contra tiempo de la UREA.

Cálculos para la determinación de urea

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Tabla 3. Resultados de la determinación de creatinina

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Figura 2. Grafica de la absorbancia contra tiempo de creatinina.

Cálculos para la determinación de creatinina

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Tabla 4. Resultados de la determinación de ácido úrico

Cálculos para la determinación de ácido úrico

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Tabla 5.  Resultados de las concentraciones calculadas

Tabla 6. Valores de referencia

DISCUSIÓN

En primera instancia, es importante mencionar que para la determinación de urea se llevó a cabo un método enzimático-cinético. Como podemos ver, en la primera reacción, ninguno de los elementos que participan directamente pueden absorber la luz, por lo que es necesario acoplar una segunda reacción en la que el sustrato presente un máximo de absorción. Para empezar, el amoniaco (NH3), que es el producto de la primera reacción, se usa como sustrato de una segunda reacción, y el alfa-cetoglutarato y el NADH junto con el glutamato deshidrogenasa (GLDH) deben encontrarse a concentraciones saturantes para que la velocidad de la segunda reacción sea la máxima. De esta manera, analizando esta segunda reacción podremos evaluar la actividad enzimática de la primera.

En la mayoría de los análisis enzimáticos se utilizan las características de la coenzima NAD+, porque tienen la propiedad óptica de absorber luz a 340 nm cuando está en forma de NADH (reducida). Por otro lado, la reacción enzimática se mide por el decremento de la Absorbancia a medida que el NADH se oxida, así, la actividad de una oxidorreductasa que use NADH como coenzima puede ser monitorizada siguiendo el descenso de la absorbancia a 340 nm a medida que se consume el NADH.

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En este caso fue usual el uso de la luz ultravioleta (luz UV), con una longitud de onda a 340 nm, punto en el que se encuentra la porción UV del espectro. Esto se utilizo porque especialmente sirve para monitorizar reacciones en las que participa el NADH, y coenzimas que participan en infinidad de reacciones bioquímicas y que absorben luz UV en forma reducida (NADH), pero no en forma oxidada (NAD+)

Por último, se midió la absorbancia en diferentes intervalos, los cuales fueron de 30S y 90S con un minuto de diferencia. En este caso, el primer punto de medición, llamado fase de adaptación o retardo, tiene lugar inmediatamente después de mezclar los reactivos con la muestra biológica. Por lo que es una fase de encuentro, acoplamiento de sustrato y enzima; su duración en este caso fue de segundos.

A medida que fue transcurriendo la reacción y el tiempo, se midió la absorbancia en 90S, lo que quiere decir que llegó un momento en que el sustrato u otro reactivo se fue agotando (fase de agotamiento de sustrato) y la velocidad de reacción disminuyó hasta anularse.

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