Practica de tinción de Gram

“Año de la universalización de la salud”

[pic 1]

LABORATORIO CLINICO

Modulo: Microbiología, parasitología, uroanálisis y citología en salud  

Unidad didáctica: microscopia

Tema: Coloración de Ziehl Neelseen

Semestre: III

Profesor: Placido Santos Falcon

Integrantes:

• Polinar Crisostomo Cecia Sanai
• Chacón Arratea Alex Fredy
• Sabino Evaristo Gina
• Gómez Poma Lucy
• Nieves Cerna Saturnino

TINCION DE  ZIEHL NEELSEEN

PROPOSITO:

Coloración de los macroorganismos para la identificación de patógenos, para poder visualizar las bacterias resistentes a alcohol acido.

MUESTRA REQUERIDA

2ml de esputo

IMPLEMENTOS DE BIOSEGURIDAD:

• Guardapolvo
• Mascarilla
• Gorra
• Guates descartables

MATERIALES Y REACTIVOS

• Laminas o portaobjetos
• Baja lengua
• Papel filtro
• Fósforo
• Fucsina fenicada
• Azul de metileno
• Aceite de inmersión
• Alcohol acido

EQUIPOS:

• Mechero de bunsen
• Microscopio óptico

PREPARACION DE REACTIVOS:

• Fenol acoso se prepara:

Fenol cristalizado …………100g

Agua destilada ………………10ml

• Fucsina fenicada se prepara:

Fucsina básica ………………………3g

Alcohol de 95%.........................100ml

Fenol acoso …………………………….55ml

Agua destilada …………………………100ml

• Azul de metileno se prepara:

Azul de metileno en polvo …………1g

Alcohol de 95% ………………………….100ml

Agua destilada ………………………...…. 900ml

PROCEDIMIENTO:

• Entramos al laboratorio con todas las barreras de protección. [pic 2]

• Tener listo todos los materiales que utilizaremos en la práctica.
• Prendemos el mechero y fijamos la lámina, con la ayuda de baja lengua extendimos la muestra. [pic 3]
• Llevamos la muestra a campo de tinción.
• Filtrar los colorantes antes de utilizar.
• Cubrimos toda la muestra con el colorante de fucsina fenicada [pic 4]
• Hacemos la técnica de tres humos [pic 5]
• Pasamos a enjuagar la muestra con agua a chorro lento.
• Cubrimos toda la muestra con el alcohol acido y dejamos por 2 minuto luego pasamos a enjuagar con agua a chorro lento. [pic 6]
• Por último, cubrimos toda la muestra con el azul de metileno dejamos 1 minutos y luego pasamos a enjuagar con agua a chorro lento, dejamos la muestra que seque a temperatura ambiente. 
• Una ves secada la muestra introducimos 1 gota de aceite de inmersión y llevamos a microscopio.
• Leemos la muestra con el ocular de 10 y objetivo de 100x. [pic 7]

FUENTES DE ERROR:

• No filtrar los colorantes.
• No dejar el tiempo suficiente para el secado de extendido.
• Incumplir los tiempos de coloración.
• Cubrir a preparación con insuficiente fucsina.

FORMA DE REPORTE:

En presencia de Bacilos de koch: reporte: son bacterias que dañan a los pulmones del ser humano.

[pic 8]

En ausencia de bacilos de koch: reporte: no se observan nada.

...