La práctica de colores simples y complejos. Tincion Gram

Coloraciones

1. OBJETIVOS

• Identificar y clasificar las bacterias en Gram Positiva o Gram Negativa.

• Afianzar la práctica y conocimiento sobre el manejo del microscopio.

• Practicar las coloraciones simples y compuestas.

2. INTRODUCCION

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado, y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella

3. MATERIALES

 Cubre y porta objetos.

 Mechero de alcohol.

 Pinzas de madera.

 Microscopio.

 Agua destilada.

 Reactivos:

o Violeta de genciana.

o Lugol.

o Alcohol-acetona.

o Safranina.

4. PROCDIMIENTO

1. Se limpió el área en el cual se iba a trabajar así como los porta y cubre objetos con alcohol.

2. Se tomó la muestra de 2 estudiantes haciendo el raspado de lengua con el portaobjeto y se paso a flamear al mechero.

3. Con la muestra ya seca se paso a realizar los siguientes pasos:

Pasos Métodos GRAM POSITIVA GRAM NEGATIVA

Colorante Básico Violeta de genciana (luego de 30seg. se lava con agua el exceso de colorante).

Se tiñe de violeta

Se tiñe de violeta

Mordiente Lugol (pasando 1 min. se lava con agua el exceso de colorante).

Permanece violeta Permanece violeta

Decoloración Alcohol de 95% o Alcohol-Acetona (durante aprox 30seg. se lava con agua el exceso de disolvente)

Permanece violeta

Se decolora

Contraste Fucsina o Safranina (luego de 30seg. se lava con agua el exceso de colorante)

Permanece violeta

Se tiñe rosa

Observar al microscopio

Colocar sobre el trotis una gota de aceite de inmersión

Violeta

Rosa

5. RESULTADOS

 En ambas muestras pudimos encontrar que las bacterias que más se pudieron observar fueron los cocos.

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