Tincion Simple Microbiologia

INTRODUCCION

La preparación de un frotis o extensión sobre un portaobjetos es de vital importancia para poder aplicar los métodos de tinción que permiten la observación de bacterias al microscopio óptico. Se realiza usando una pequeña cantidad de cultivo bacteriano, extendiéndola sobre un portaobjetos limpio y fijándola. Ya que la mayoría de bacterias no tienen colorantes y no pueden ser distinguidas se aplica colorantes para teñirlas y poder observarlas. A través de la siguiente práctica podremos realizar un frotis bacteriano para su posterior tinción (método simple) y poder luego observar las distintas formas, tamaños y agrupaciones que presentan los microorganismos observándolos con un microscopio óptico compuesto. La fijación de una extensión bacteriana es fundamental para que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio del porta objeto. Siempre procurando que este proceso altere lo menos posible la morfología bacteriana. Las bacterias están suspendidas en agua, por lo tanto, se puede hacer la fijación calentando la muestra con el mechero, pero teniendo cuidado de no excederse para que las bacterias no se deformen ni se rompan.

OBJETIVOS

• Conocer y realizar la prueba de fijación, la cual tiene por finalidad adherir a las bacterias en la lamina portaobjetos, para posteriormente realizar la prueba de tinción simple.

• Diferenciar las formas, tamaños y agrupaciones de las bacterias a observar.

FIJACIÓN DE UN CULTIVO BACTERIANO

MATERIALES

- Lamina porta objeto

- Mechero bunsen

- Microscopio óptico compuesto

- Asa de Kolle

- Pinza de madera

- Encendedor

- Cultivos bacterianos : Escherichia coli, Bacillus y Staphylococcus aureu

- Pizeta con agua

METODO

• Poner una gota de agua sobre la lamina porta objeto el cual debe de estar limpio.

• Esterilizar el asa de kolle y con este extraer una pequeña cantidad de muestra bacteriana

• Remover la mezcla homegenizandola y luego esparcirla para facilitar su secado.

• Secar la muestra con ayuda del mechero, esta no debe de ser colocada directamente al fuego, si no debe de ser pasada sobre la llama alternadamente dejándola un tiempo de descanso fuera de ella.

TINCION SIMPLE

MATERIALES

- Muestra bacteriana fija.

- Pizeta con agua.

- Soporte para tinción

- Mechero

- Aceite de inmersión.

- Colorantes: Cristal violeta, fucsina y azul de metileno.

METODO

• Cubrir la muestra fija con abundante colorante y dejar reaccionar cada muestra según su grado de reacción:

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