Importancia en microbiología tinción de Gram

UNIVERSIDAD PERUANA UNIÓN

FACULTAD DE INGENIERÍA Y ARQUITECTURA

E.A.P. Ingeniería Ambiental

INFORME DE LABORATORIO N° 5

“TINCIÓN GRAM”

Autor:

Tinoco Canto, Jhoenmert Edgar

PROFESOR

Ing. Rajo Angulo Renzo Roy

Villa Unión, 03 de Abril del 2015

INFORME DE LABORATORIO N° 5

“TINCIÓN GRAM”

I. INTRODUCCIÓN

Tinción Gram es de gran importancia en la microbiología pues permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram negativo, y Gram positivo) dependiendo del comportamiento ante esta tinción. Esto sucede en las diferentes estructuras de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano fina y una capa de lipopolisacaridica externa, mientras las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano más fina.

En el procedimiento se vierte el primer colorante (Cristal Violeta) seguido se adiciona yoduro (lugól) que reacciona con el cristal y forma un complejo cristal violeta-yoduro, luego se efectúa un lavado con etanol que arrastra al colorante esto sólo sucede en las Gram-, mientras en las Gram+ el colorante queda retenido y las células permanecen azules. Después se agrega el colorante (safranina) que se encargara de dar contraste a las células Gran-.

Por lo cual el objetivó de la práctica es utilizar las técnicas de Tinción Gram para observar y diferenciar los diversos microorganismos de las muestras de pan con lomo, agua y pate.

II. OBJETIVO

2.1. Objetivo General

• Aplicar las técnicas de Tinción Gran para observar, diferenciar e identificar el tipo de tinción (Gram+ o Gram-) y la clasificación de cada uno de los diversos microorganismos de las muestras de pan con lomo, agua y pate.

2.2. Objetivo especifico

• Diferenciar y clasificar los diversos características de los microorganismos

• Determinar la diferencia entre las bacterias Gram+ y Gram-.

• Identificar con el microscopio el tipo de tinción y morfología de cada microorganismo.

III. MARCO TEÓRICO

La tinción es una de las técnicas más utilizadas en los laboratorios de microbiología para clasificar microorganismos. (Stainer & Wheelis, 2005)

El tinte es un compuesto orgánico que le da contraste a la célula. (Martos, 2007)

• Cromógeno: Solvente orgánico que le da las propiedades de color.

• Auxocromo: Grupo químico que se ioniza con el cromógeno y forma de sales que se pegan a las fibras y tejidos.

• La adhesión del tinte va depender de la carga que posea.

3.1. TINCIÓN GRAM

Esta tinción desarrollada por el doctor Christian Gram en 1984, es hoy la más utilizada en los laboratorios de bacteriología y permite, de acuerdo con la estructura y groso de la pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas y en Gram negativas, las Gram positivas poseen una capa de peptidoglicano y carecen de membrana externa, mientras que la Gram negativas tiene una capa más delgada de peptidoglicano y poseen una membrana externa. (Rodriguez & Hernandez, 2006)

Algunas bacterias se clasifican como Gram Variables, pues simultáneamente presentan tinción de Gram positivas y de Gram negativas, aun bajo condiciones óptimas de cultivo. Sin embargo, en su estructura estas bacterias poseen una pared de Gram positivas, aunque la capa de peptidoglicano es más delgada que la mayoría de las bacterias Gram positivas. (Rodriguez & Hernandez, 2006)

Esta tinción además, correlaciona con otras propiedades como endotoxinas, susceptibilidad a antibióticos, sensibilidad o resistencia a sales biliares, punto isoeléctrico y tensión superficial. (Rodriguez & Hernandez, 2006)

Según (Rodriguez & Hernandez, 2006) existen variaciones de esta técnica, pero en términos generales, la tinción de Gram involucra varios pasos:

A. Tinción Inicial: las células se tiñen con cristal violeta, el cual es el colorante primario. En este paso todas las células se tiñen de morado.

B. Mordente: Se adiciona yoduro (lugól) que reacciona con el cristal y forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto todas las células continúan de color morado.

C. Decoloración: Se adiciona un solvente no polar, el cual actúa lavando el complejo cristal violeta-yoduro de las células de Gram negativas. De esta manera las bacterias Gram positivas continúan moradas y las Gram negativas quedan incoloras. Este es el paso critico de esta tinción, pues si se exagera, decolora las Gram positivas y si se hace muy débil no decolora a las Gram negativas.

D. Contratinción: Se vuelve a teñir con safranina o fucsina, de manera que las bacterias Gram negativas, que habían sido decoloradas, se tiñen de rosado a fucsia según el colorante empleado; en tanto, las bacterias Gram positivas no se afectan con la contratinción y permanecen moradas debido a lo intenso de esta coloración.

Además de una excesiva decoloración, otro factor que puede influir en que las bacterias Gram positivas se observen parcial o completamente rosadas, es la edad del cultivo; las células viejas tienden a perder su capacidad de retener el complejo cristal violeta- yoduro y por lo tanto las bacterias se verán rosadas. Otro factor de variabilidad podría ser condiciones de estrés durante el cultivo, que genera formas Gram negativas no viables, dentro de un cultivo de células Gram positivas. (Rodriguez & Hernandez, 2006)

Debe prestarse atención a los lavados que se realizan al ir agregando los diferentes reactivos, se deja un exceso de agua en la lámina los reactivos se diluirán, especialmente el yoduro. (Rodriguez & Hernandez, 2006)

3.1.1. Preparación de la muestra para el proceso de Tinción.

Según (Rodriguez & Hernandez, 2006) la preparación de la muestre es como sigue

• Limpiar la laminilla con el papel de lentes.

• Medio líquido: Solo se coloca una porción del cultivo con el “loop” en un alamina.

• Medio sólido: Se coloca una gotita de agua destilada en la lámina y se diluye la porción de cultivo en ella.

• Secar a temperatura ambiente o por fijación de calor.

FIGURA 1 Preparación de muestras. Por (Rodriguez & Hernandez, 2006)

3.1.2. Pasos de la Tinción Gram.

Según (Martos, 2007) menciona los pasos como sigue.

• Cristal violeta. Se verte al muestra

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