Tinción De Gram

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa o rojo.

Las bacterias procariontes tienen pared celular, hay unos que tienen su pared celular muy gruesa y debido a esto cuando uno les agrega el colorante, se filtra y se fija muy bien el colorante y no se decolora del todo.

Un tipo de células tiene una sola membrana y una sola pared celular gruesa (azules).

Las otras tienen dos membranas y una pared celular muy delgada. Esta pared delgada provoca que el decolorante decolore completamente, entonces es posible agregar otros colorantes para ir tiñendo cada elemento de la célula (rojas).

Las bacterias tienen péptido-glucanos (proteínas + carbohidratos) en la pared celular.

Procedimiento:

1. Limpia la zona de trabajo con alcohol. Toma una gota del cultivo bacteriano de yogurt natural y frotis de la boca de un compañero.

2. Coloca una gota del cultivo en el centro del portaobjetos y extiéndela para hacer un frotis.

3. Acerca el portaobjeto a la llama de un mechero cuidando que el portaobjetos no se caliente demasiado, porque podría dañarse la muestra. Esto se prueba tocando por una parte de abajo el portaobjetos; al tacto no se debe sentir caliente.

4. Pasa el portaobjetos otras tres veces por la llama del mechero. Déjalo enfriar entre una pasada y otra.

5. Tiñe con cristal violeta durante 1 minuto.

6. Lava con abundante agua, evitando que esta caiga directamente sobre la muestra, para eliminar el exceso de colorante. Es importante cuidar que el agua no caiga directamente sobre el frotis, porque podría arrastrarlo.

7. Cubra con lugol durante 1 minuto.

8. Escurre el exceso de lugol.

9. Decolora con una mezcla de alcohol – acetona en proporción 70:30 por 30 segundos.

10. Lava con abundante agua.

11. Tiñe con safranina durante 30 segundos.

12. Lava con agua para eliminar el exceso de colorante.

13. Seca la preparación al aire. Coloca un cubreobjetos.

14. Observa al microscopio a 100x.

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