Preparación del sustrato de crema de leche: Ensayo

PROTOCOLO ACTIVIDAD LIPOLITICA

1. Preparación del sustrato de crema de leche:

1. Centrifugación de leche fresca
2.  Mezclar con leche desnatada reconstituida (1 g de leche en polvo + 9 mL de agua destilada) para obtener una concentración final de grasa del 25% (p / p).
3.  Dividir el sustrato en muestras de 25 g y mantener a -20 °C.

1. Actividad lipolítica del cuajo:

1. Suspender 20 gramos de cuajo en 70 ml de agua desionizada y agitar durante 20 min a 20 °C.
2. El extracto de cuajo se filtró luego a través de dos capas de estopilla y el volumen se completó hasta 100 ml con agua desionizada.Agregar una alícuota del extracto de cuajo (2.5 mL) a 25 g de sustrato de crema de leche e incubar a 37 °C durante 24 h.
3. Preparar un blanco de 25 g de sustrato de crema de leche sin extracto de cuajo
4. Titular el AGL en el volumen total del incubado con NaOH 0,1 M hasta alcanzar un pH de 8,5.

1. Titular de la misma manera el extracto de cuajo (2,5 ml) y el blanco.
2.  La actividad lipolítica de cada ensayo se calcula restando el NaOH añadido al blanco y al extracto de cuajo del volumen de NaOH añadido al incubado.

1. Extracción de ácidos  Grasos

LECHE:

1. Mezclar 10  mL de leche con 10 mL de etanol, 1 mL de H2SO4 (2,5 mol/L).
2. La extracción se realiza con 15 ml de éter / heptano (1: 1, v / v) en un tubo de centrífuga con tapa roscada de 75 ml a 2500  rpm durante 2 min a temperatura ambiente
3. Transferir la capa superior de disolvente a un matraz de 100 ml  que contenía 1 g de Na2SO4 anhidro para absorber el agua residual.
4. El procedimiento de extracción se repite dos veces con 10 ml de éter-heptano (1: 1, v / v).

QUESO:

1. Moler 1 g de queso con 3 g de Na2SO4 anhidro, 0,3 mL de H2SO4 (2,5 mol/L)
2. 3.6  La mezcla es extractada 3 veces con 3 mL de éter / heptano (1: 1, v / v).

...