Producción del biosurfactante

Materiales y Métodos

Producción del biosurfactante

Se seleccionaron seis cepas bacterianas del grupo de cepas aisladas en el Laboratorio de Microbiología Industrial del Centro de Investigación del Agua de la Universidad del Zulia (MI3, MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11). Cada una de ellas fue transferida con un asa de platino a un medio fresco de caldo Tripticasa Soya y se incubó a 37ºC durante 24h en una incubadora Memmert B-50 para su activación. Luego, 1ml de cada una de las cepas se transfirió a 9ml de caldo Tripticasa Soya y se incubaron a 37ºC hasta alcanzar un crecimiento superior a 1´108UFC/ml (Gerhardt et al., 1981; Kerr, 1981). Los cultivos se centrifugaron a 2000xg en una centrifuga MSE Med Oil-58199 por 10min para separar las células del medio de cultivo. Se descartó el sobrenadante y el centrifugado fue lavado y resuspendido en solución salina estéril. La nueva suspensión fue centrifugada a 2000xg por 10min, se descartó el sobrenadante y el centrifugado se resuspendió en un medio mínimo mineral, constituyendo así el inóculo (Duvnjak et al., 1982).

Se agregó cada inóculo (3% v/v) en fiolas que contenían un medio mínimo mineral (MMM) (89% v/v) y gasoil (8% v/v) como única fuente de carbono para un volumen total de 1 litro. El MMM usado para la biosíntesis del surfactante estuvo integrado por 1,2g NH4CL, 2,4g KNO3, 0,0005g CaCl2.6H2O, 2,4g NaSO4, 1,2g MgSO4, 0,6g K2HPO4 y 0,002g FeSO47H2O por litro de agua destilada. El MMM fue esterilizado a 121ºC y 15lb de presión durante 15min. El gasoil utilizado fue esterilizado por filtración. Seguidamente, la mezcla se colocó en una incubadora Memmert B-50, por 144h a 37ºC. Luego de la incubación, la mezcla fue centrifugada a 2000xg por 15min en una centrífuga MSE Med Oil-58199, para separar las células del sobrenadante (biosurfactante). Se tomó el sobrenadante y se adicionó, en diferentes concentraciones, a una mezcla de gasoil con agua para determinar la tensión interfacial, utilizando el tensiómetro de Lecomte Du noüy (Duvnjak et al., 1982; Roberts et al., 1991). Las cepas, cuyo sobrenadante obtenido a las 144h fue más eficiente en la disminución de la tensión interfacial de la mezcla gasoil-agua (MI9, MI10 y un cultivo mixto de ambas) fueron escogidas para la producción de surfactante en un período de incubación de 192h, siguiendo la metodología descrita inicialmente.

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