Práctica Aprender las técnicas de preparación de frotis, fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianas, obtenidos de medios sólidos y líquidos

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN[pic 1][pic 2]

ESCUELA INDUSTRIAL Y PREPARATORIA TÉCNICA ÁLVARO OBREGÓN UNIDAD LINARES

Técnico Laboratorista Industrial

        Bacteriología

                                                  Practica 2

                                      Docente: Juana María Silguero Morales

                                 Alumna:

                                 Cruz Rivera Flor Angélica 1922876

Grupo:   3C1         Aula:08

                                                           11 de Septiembre a linares nuevo león 2018

Propósito:

Aprender las técnicas de preparación de frotis, fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianas, obtenidos de medios sólidos y líquidos

Introducción:

El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre un portaobjetos, en el cual se fijan y tiñen los microorganismos. De acuerdo al número de soluciones colorantes y a los objetivos de estudio se pueden realizar diferentes tipos de tinciones como son: simple, diferencial, negativa y selectiva. La mayoría de las bacterias son teñidas por colorantes básicos que permean la pared celular y se adhiere por enlaces iónicos débiles a moléculas con cargas negativas de la célula bacteriana. La tinción de las bacterias con azul de metileno, es un ejemplo de tinción simple que facilita la observación de forma, tamaño y arreglo de las células.

Materiales:

• Vaso de precipitado de 100ml
• Asa de siembra
• Pipeta
• Portaobjetos
• Mechero de Bunsen
• Microscopio compuesto

medios de cultivos y soluciones:

• Agua destilada
• Azul de metileno
• Aceite de inmersión  

Procedimiento:

1. Preparación del frotis:

1. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel e identificaros.
2. Prender el mechero y esterilizar el asa en flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo.
3. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos.
4. Para tomar la muestra de tubos con medios de cultivo sólidos, acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapón. Introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra.
5. Colocar en el centro de portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra del cultivo que se toma tocando la zona de crecimiento suavemente con el asa estéril.
6. Extender la muestra en el portaobjetos y dejar secar al aire libre.

1. Fijación de frotis:

1. Los frotis de cultivos sólido, completamente seco, se fijarán con calor. Para esto se pasa el frotis rápidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero.
2. Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.

1. Tinción simple:

1. Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto.
2. Eliminar el exceso de colorante con lavado suave con agua destilada y dejar secar al aire libre.

1. Observación al microscopio:

1. Ajustar el haz de luz en el centro del campo de observación.
2. Colocar los portaobjetos en la platina y empezar a localizar la preparación con los objetivos de 10x, 40x, y con el de 100x se le colocara en este objetivo una gota de aceite de inmersión sobre la preparación.

Pasos:

1                                              2                                        

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3                                           4

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Resultados:

Se llego a observar en base a la fijación y el estudio del microscopio, los tipos de cultivos bacterianos.

10x

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40x

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100x

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Observación: en esta práctica llegue a observar en el microscopio los cultivos bacterianos obtenidos.

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