Respiracion Celular

Resumen: El proceso de extracción del DNA es una técnica muy importante ya que consiste en separar el DNA de cualquier tipo de tejido ya sea vegetal o animal, en nuestra experiencia trabajamos con tejido animal (bazo de cerdo), en primer lugar se rompió la pared celular para poder acceder al núcleo de la célula a través la técnica del licuado, luego con el amortiguador salino se solubilizan las moléculas; posteriormente el precipitado obtenido le añadimos NaCl para solubilizar la desoxirribonucleoproteina y la liberación de las fibras de cromatina; posteriormente al tratar el precipitado con una mezcla de cloroformo/alcohol amílico separamos la proteína; luego mediante la adición de etanol a la fase acuosa se precipito el ADN el cual enrollamos en una varilla de vidrio. A través de este método de extracción obtuvimos resultados favorables en donde se pudo observar la hebra de ADN del bazo de cerdo que posteriormente se le aplicaran pruebas de pureza.

Introducción:

La estructura del ADN de doble hebra es universal en todas las células vivas, pero se producen diferencias en los métodos para la extracción del ADN genómico de células animales y vegetales. El ADN genómico se encuentra en el núcleo de las células. La cantidad y la pureza del ADN extraído dependen del tipo y tamaño de la célula, como ciertas células contienen más ADN e impurezas que otras. (Cawson, 2009).

La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN. (Strathern , 2006).

El ADN puede aislarse mediante ruptura de tejidos, y luego aprovechando las diferencias entre las propiedades de los ácidos nucleicos, las proteínas y demás constituyentes celulares. Tras la lisis celular, se trata de inhibir las nucleasas, ya que esta degradarían el material a purificar, para luego desproteinizar la muestra, ya sea mediante métodos químicos (solventes orgánicos, detergentes no iónicos ) o enzimas (proteasas). (Giraldo, 2008).

Materiales: Balanza analítica Kern modelo 573-34NM, licuadora Oster, centrifugadora Orto-Alresa modelo Digicen, tubos de centrifuga, policial, espátula, gotero, potenciómetro Eco Testr pH 2, vasos químicos de 100, 250,600 mL, micropipetas, probetas de 10 y 25mL.

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