Separación De Los Pigmentos Fotosintéticos De Las Hojas (LABORATORIO)

Separación de los pigmentos Fotosintéticos de las hojas

Objetivos:

1. Explicar los principios básicos de la cromatografía de papel.

2. Utilizar la cromatografía de papel para separar los pigmentos de una hoja

3. Determinar el Rf de cada uno de los pigmentos.

Introducción

Una hoja verde es de ese color debido a una mezcla de varias sustancias coloreadas, la mayoría de las cuales son de color verdoso y, otros son amarillos o anaranjados.

Los distintos compuestos coloreados de las hojas (los científicos les llaman pigmentos), al ser absorbidas éstas por un papel filtro.

Al subir el solvente por el papel, los distintos pigmentos de la hoja se van separando porque algunos se mantienen por más tiempo que otros en el líquido ascendente. Esta técnica de separación de pigmentos u otras sustancias disueltas, se conoce como cromatografía de papel, y se debe a la diferencia de solubilidad de las sustancias en el solvente y la tendencia que tienen estas sustancias de adherirse al papel filtro.

Materiales:

1. Papel de cromatografía

2. Tubo de ensayo grande con tapón

3. Hojas de espinaca u otra planta

4. Mortero y pistilo

5. Alcohol

6. Capilares de vidrio

7. Mezcla de 45 ml de éter de petróleo, 5 ml de acetona y ml de benceno

8. Papel filtro.

Procedimiento:

A. Preparación del extracto de pigmentos:

1. Coloque unos 20 gramos de hojas a las cuales se le eliminan las venas principales en un mortero. Agregue alcohol hasta cubrirla y muela para obtener la mezcla de pigmentos (verde oscuro).

2. Filtre la mezcla con papel filtro y embudo en un vaso químico hasta obtener el filtrado verde puro

B. Preparación del cromatograma

1. Corte un pedazo de papel de cromatograma al tamaño del tubo de ensayo como se le indicará.

2. Corte uno de los extremos a 2 cm de manera que la punta sea triangular y trace una línea con lápiz con un punto central.

3. Con un capilar fino de vidrio añada gota a gota el extracto de clorofila en el punto central. Cada gota debe agregarse después que la anterior este seca.

4. Cuando tenga concentrado el pigmento coloque la tira de papel filtro en el gancho e introdúzcalo en el tubo de ensayo que contenga la mezcla de acetona, éter de petróleo, y benceno teniendo el cuidado de que el papel no toque las paredes del tubo ni haga contacto con la mancha de pigmentos.

5. Deje correr el cromatograma hasta que el solvente llegue cerca de la parte superior. Saque el cromatograma e inmediatamente trace una línea con lápiz hasta donde llego el solvente.

6. Distinga los diferentes pigmentos y coloque un punto a lápiz en el centro de la mancha de cada color. Cada color corresponde a un pigmento así:

verde-azul = clorofila a

verde= clorofila b

amarillo-anaranjado= caroteno

amarillo=xantofilas.

C. Determinación del Rf.

1. El rf es un parámetro para identificar un pigmento u otra molécula siempre que la técnica de separación se realicé bajo las mismas condiciones:

Rf = distancia recorrida por el soluto/ Distancia recorrida por el solvente

2. Calcule el Rf para cada pigmento.

D. Fenómeno de fluorescencia de clorofila.

1. Coloque el extracto de clorofila en un tubo de ensayo pequeño

2. Coloque el tubo de ensayo con el extracto en una fuente de luz y observe en la superficie superior ¿Qué color observa? Explique.

R: Cuando colocamos el tubo de ensayo con el extracto bajo la luz observamos que se forma un anillo en la superficie de color rojo oscuro, muy parecido a un chocolate. La energía luminosa altera o excita ciertos electrones de la molécula de clorofila y estos son transferidos a moléculas aceptoras de electrones

Análisis

1. Por qué se utiliza alcohol para extraer los pigmentos de la hoja?

R: se utiliza alcohol para extraer los pigmentos de la hoja porque estos son solubles en alcohol y cualquier compuesto orgánico.

2. Qué información se ha obtenido sobre los pigmentos de la hoja a pesar de que estas se ven generalmente verdes?

R: Las clorofilas tienen dos picos de absorción en el espectro visible: - uno en el entorno de la luz azul y otro en la zona roja del; - sin embargo reflejan la parte media del espectro, la correspondiente al color verde. Esta es la razón por la que las clorofilas tienen color verde y se lo confieren a aquellos tejidos que tienen cloroplastos activos en sus células. Las clorofilas

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