Siembra, aislación, Incubación e identificación de microorganismos

Siembra, aislación, Incubación e identificación de microorganismos

Integrantes:        Tahiara Mores
Josselyn Lavanderos

Docente:                Elizabeth Carriman        

Introducción

La vida microscópica está presente en ambientes tan cotidianos como los alimentos que ingerimos, el agua que bebemos, los utensilios que utilizamos para cocinar o comer; incluso en nuestro propio cuerpo. Su presencia, por lo general, pasa desapercibida, pero puede ser un factor determinante que, si no es favorable, representa un riesgo para la salud del ser humano.

Una de las formas más básicas para poner de manifiesto la presencia de microorganismos es su desarrollo sobre placas de cultivo, donde tras un proceso de incubación, en esta podrán ir manifestándose en modo de colonia.

En el siguiente informe, presentaremos a usted proceso con el cual comenzamos con la incubación de microorganismos extraídos desde el agua de lavado de una lechuga, posterior al crecimiento bacteriano, realizamos aislamiento de estos, para concluir con la tinción o coloración gram con el objeto de determinar el tipo de microrganismos presentes en la muestra y daremos a conocer nuestros resultados visualizados desde un microscopio.

Procedimiento en laboratorio

1. Preparación del Agar

Materiales a utilizar:

• Balanza de precisión
• Probeta
• Matraz Erlenmeyer
• Varilla para agitación
• Espátula  
• Algodón
• Papel Kraft
• Mechero Bunsen
• Agar Selenite Broth  (Salmonella)
• Agua Destilada
• Placa petri

Proceso de preparación:

• Comenzamos con la selección del agar a utilizar verificando sea especifico o no especifico, dependiendo de lo que queremos que prolifere en la incubación de este. Utilizaremos Agar Selenite broth el cual resulta específico para Salmonella.
• En la probeta debemos medir 100 ml de agua destilada. En paralelo, con ayuda de la balanza pesaremos 2,3 g del agar seleccionado. En matraz Erlenmeyer uniremos el agua destilada y el agar pesado, con la varilla de agitación homogeneizaremos la mezcla. Llevaremos a mechero bunsen el matraz y calentaremos hasta su ebullición, una vez alcanzada esta, sellaremos con la ayuda del algodón el cual utilizaremos como tapon, cubriremos el algodón con papel kaft.
• Lista nuestra mezcla, llevaremos a autoclave (120°C) para su esterilización, dejaremos actuar durante 15 a 20 minutos.
• Una vez listo, vaciaremos este agar en una placa Petri ya esterilizada, dejar enfriar y solidificar el líquido hasta que quede más espeso que la consistencia de una jalea.
• Con esto estará lista nuestra placa para poder sembrar en esta.

1. Siembra e incubación de microorganismos

Materiales a utilizar:

• Agua lavado de hortalizas
• Micropipeta
• Placa Petri con agar
• Asa digralsky
• Parafilm
• Mechero bunsen
• Alcohol

Proceso de preparación:

• Encender el mechero bunsen y realizar todo el procedimiento cerca de este con el objeto de mantener un ambiente limpio para que no interfiera con la siembra. Con ayuda de la micropipeta, tomaremos 0,5 ml del agua ya separada resultante del lavado de la hortaliza y trasvasijaremos a nuestra placa Petri intentando abrir lo menos posible para evitar el contacto de microorganismos del aire con nuestra muestra. En paralelo, sumergir la punta del asa digralsky en alcohol y flamear en fuego para esterilizar, sin dejar que se caliente demasiado.
• Abriremos nuestra placa y con el asa ya estéril, esparciremos el líquido que depositamos dentro, cuidando de no romper el agar.
• Sellaremos bien la placa utilizando el parafilms para posterior a esto llevar a incubación.

1. Aislamiento de microorganismos

Materiales a utilizar:

• Colonia formada en placa Petri anteriormente incubada,
• Asa de filamento
• Placa Petri estéril con agar nuevo
• Mechero de alcohol
• Alcohol
• Parafilms

Proceso de preparación:

• Encender el mechero con el objeto de mantener un ambiente apto para la siembra de microorganismos.
• Una vez identificadas las colonias más importantes en la placa Petri incubada, escoger una para volver a resembrar.
• Utilizaremos asa de filamento plástica, la cual esterilizamos con alcohol. Al abrir la placa con colonias formadas, con asa tomar una punta del cultivo para trasvasijar a nueva placa con agar, esparciéndolo suavemente en forma de zigzag, cuidando de no romper ni pasar a llevar el agar.
• Sellar la nueva placa con ayuda del parafilms, para llevar nuevamente a incubación.

1. Identificación de los microorganismos

Procedimiento en fresco

Materiales a utilizar:

• Porta objeto
• Cubre objeto
• Agua destilada
• Asa de filamento
• Alcohol
• Microscopio
• Colonia formada por aislación en placa Petri

Proceso de preparación:

• Para comenzar utilizaremos el porta objeto y situaremos en el centro una a dos gotas de agua destilada.
• Esterilizar asa de filamento con alcohol de uno a dos minutos, para con esta, extraer desde la placa ya colonizada una muestra y ubicarla en el centro de la gota situada en el centro del porta objeto, moviendo el asa intentando diluir la muestra en el agua.
• Cubrir con el cubre objetos para llevar inmediatamente al microscopio y poder observar e identificar microorganismos presentes.

1. Identificación de los microorganismos

Tinción o coloracion Gram

Materiales a utilizar:

• Tintes (Cristal violeta (morado), Lugol (amarillo), Sefranina (rosa) y Alcohol)
• Porta objeto
• Mechero de alcohol
• Agua destilada
• Asa de filamento
• Microscopio

Proceso de preparación:

• Tomar el porta objeto e insertar un gota de agua destilada en el centro, tomar muestra con el asa de filamento desde placa coloniizada y diluir la muestra en el agua.
• Flamear esta muestra sobre el mechero de alcohol sin calentar vidrio con el objeto de secar completamente la gota de agua con la muestra.
• Ya seca la muestra, aplicar 1 o 2 gotas de cristal violeta, dejar actuar por 2 a 3 minutos, lavar con agua de la llave cuidando que no golpee la muestra directamente.
• Aplicar nuevamente tinción, esta vez lugol, 1 o 2 gotas, dejar actuar por 1 a 2 minutos, lavar nuevamente cuidando de no arrastrar la muestra.
• Se aplicara una gota de safranina dejando actuar por 2 a 3 minutos, y lavar nuevamente, siguiendo el proceso anterior.
• Por último, aplicaremos 1 gota de alcohol el cual dejaremos actuar como máximo 1 minuto, lavar nuevamente para retirar el exceso de alcohol. Llevar a microscopio y observar reacciones a tinción de microorganismos.

Resultados obtenidos

• Siembra e incubación de microorganismos

A simple vista podemos observar la proliferación de hongos en la muestra.

También pudimos ver colonias pequeñas de color beige con el centro blanco. Junto a estas colonias se observaron muchas pseudomonas presentes en el agar.

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