Tema- Microbiologia.

LABORATORIO Nº 6

DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES POR EL METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA. (Rio Meléndez)

La determinación de coliformes totales y fecales es importante realizarlo principalmente en las aguas que deben ser potables y pueden realizarse por diferentes técnicas. Con la ayuda de este laboratorio se pretende determinar la formación de coliformes totales y fecales usando la técnica por filtración por membrana, donde un volumen de agua se filtra por una membrana de tamaño (0.45 micras) que retiene las bacterias en la membrana para luego se sembrada en un medio selectivo para el crecimiento de las bacterias y la formación de colonias.

INTRODUCCIÓN

El agua es una de las principales fuentes de vida de nuestro planeta, son infinito los usos del agua, para consumo humano, para labores domesticas, en las industrias farmacéuticas, se utiliza en diferentes actividades como en el lavado de materiales, utensilios áreas accesorias y de análisis y de base para la preparación de medicamentos y/o cosméticos en este área el agua debe cumplir unos estándares mas estrictos  y su sistema de purificación debe ser eficaz ya que el agua puede ser uno de los principales transmisores de enfermedades entéricas si se llagara a consumir en estado de contaminación; entre los microorganismos indicadores de agua, se puede encontrar las bacterias del grupo coliforme perteneciendo a este grupo, géneros como: Escherichia Coli, Enterobacter spp; Klebsiella spp .

Los coliformes son  indicadores de contaminación fecal,  para el agua de calidad apta para el consumo humano en razón de que, en los medios acuáticos, los coliformes tienen factores que permitan su crecimiento su crecimiento; como lo son, cantidad y tipo de nutrientes, oxigeno, temperatura, PH  Los coliformes son de origen fecal y son mas resistentes que las bacterias patógenas intestinales, lo cual nos indica que  su ausencia indica que el agua es bacteriológicamente segura.

La presencia de bacterias coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo.

OBJETIVO GENERAL

El estudiante esta capacitado para determinar la cantidad de coliformes totales y fecales en aguas no potables, por el método de filtración de la membrana.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Manejar adecuadamente  cada uno de los instrumentos utilizados en el laboratorio, para este caso el método de filtración por membrana.
• Observa, reconocer y analizar la presencia de coliformes totales y fecales en el agua en rio Meléndez

MATERIALES

Los propuestos en la guía para realizar el laboratorio, sugeridos por la docente Delly B. Tosse.

METODOLOGÍA 

1. PREPARACION DE LAS DISOLUSIONES

Muestra de agua no potable

1. DISOLUCION 10-1 = se toma asépticamente  20ml de la muestra del agua no potable y se lleva aun frasco que contiene 180ml de agua peptonada.
2. DISOLUCION 10-2= se toma asépticamente  20ml de la muestra  10-1  y se lleva aun frasco que contiene 180ml de agua peptonada.
3. DISOLUCION 10-3= se toma asépticamente  20ml de la muestra 10-2 y se lleva aun frasco que contiene 180ml de agua peptonada.

1. FILTRACION

• Se ensambla la parte de abajo del embudó  de filtración sobre el erlenmeyer. Con la pinza estéril se coloca la membrana sobre la rejilla se procede a colocar la parte superior del equipo de filtración y asegurar con la pinza del equipo. En la probeta estéril se miden 100 ml del agua a analizar empezando por la de mayor disolución 10-3 luego con 10-2 y10-1 se procede a desarmar el equipo de filtración con la pinza estéril retirar la membrana y colocar sobre la caja de petri con el medio de cultivo se rotula la caja de petri con el nombre de la muestra, la disolución a la que corresponda, fecha y grupo se continua lavando con agua destilada estéril el equipo entra la filtración de las diluciones se realiza el procedimiento desde 2.4 a 2.7 con la disolución 10-2 y 10-1; Se procede a incubar todas las cajas de petri a una temperatura  de 37ºC por 24 horas.  

ANTECEDENTES

COLIFORMES DEFINICION

Los coliformes fecales también coliformes termo tolerantes llamados así por que soportan temperaturas hasta de 45 ºC , comprende un grupo muy reducido de microorganismos los cuales son indicadores de calidad ya que son de origen fecal. En su mayoría están representados por el microorganismo E. coli pero se pueden encontrar entre otros menos frecuentes, Citrobacter Freundii Y Klebsiella pneumoniae estos últimos hacen parte de los coliformes termo tolerantes, pero su origen se acciona normalmente con la vegetación y solo ocasionalmente aparecen en el intestino (HAYES; 1993)

Los coliformes fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se diferencian de los demás microorganismos que hacen parte de este grupo, ya que son indol positivos, su rango de temperatura optima de crecimiento es muy amplio (45ºC) y son mejores indicadores de higiene en los alimentos y en aguas, la presencia de estos indica presencia de contaminación fecal de origen humana o animal, ya que las heces contiene dichos microorganismos presentes en la flora intestinal y de ellos entre un 90% y un 100% son E. Coli mientras que en aguas residuales y en muestras de aguas contaminadas este reduce hasta un 59%.

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