Toxicidad celular

 Toxicidad Celular

Introduccion

Las células muertas se tiñen de azul, mientras que las células vivas eliminan el  azul de tripano. No se puede distinguir necrótico vs  células apoptóticas.

Materiales:
Azul de tripano: diluir a 0,4 %  en PBS. Almacenar a temperatura ambiente. Estable durante 1 mes

Suspensión celular de macrófagos (deben mantenerse en hielo)

[pic 1]

[pic 2]

        Cuadrado  lateral[pic 3]

Camara de Neubauer, usar una de las esquinas para el recuento

[pic 4]

Para los cálculos:

 Numero de células por ml = promedio de células por cuadrado lateral x 160000

Procedimiento:

Colocar en un tubo eppendorf 50 ul de suspensión celular (macrofagos)

Anadir al tubo 50 ul de azul de  tripan

Mezclar  por pipeteo

Dejar en reposos 5 minutos.

Pipetear 20 microlitros de la mezcla y colocar en la cámara de neubauer

Observar al microscopio con 40 X

Dibuje la diseccion de una rata en el momento de obtener los macrofagos

Resultados:

Visualizar la cuadrícula del hemocitómetro bajo el microscopio, se refieren a la figura 1 para el diseño de la red. Por favor, tenga en cuenta:

i. Trypan azul es una "mancha vital", sino que se excluye, entonces las células están vivas.
ii. Las células vivas son incoloras y brillantes (refringentes) con contraste de fase.
iii. Las células muertas se tiñen de azul y no son refractantes.
iv. Para ayudar a la precisión y la coherencia de los recuentos de células utilizar sistema de conteo se ilustra en la figura .

1. Con la ayuda de la Camara de neubauer , Hacer el recuento del numero de células presentes en  la suspensión celular.
2. Observar y dibujar las observaciones  A 40x, de la mezcla de celulas coloreadas con Azul de trypan y expresar los resultados de toxicidad en Porentaje de células muertas
3. Hacer el recuento de células muertas a los 5 minutos y a los 30 minutos, convertir en porcentaje y presentar en un histograma.  (eje Y: poretnaje de células muertas, Eje X: 5 minutos y 30 min utos.

Bibliografia

Visite la pagina y observe  http://www.youtube.com/watch?v=wPeNK0pRIpA

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