Transformación genética de bacterias con el gen de la proteína verde fluorescente (GFP)

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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA

División de Ciencias Naturales e Ingeniería

Laboratorio de Ingeniería Genética y Técnicas Moleculares

Octavo Trimestre

Equipo 3

 Cuestionario: Transformación genética de bacterias con el gen de la proteína verde fluorescente (GFP)

(Genetic Transformation of Bacteria with the Gene for Green Fluorescent Protein (GFP))

Responsables:

Manuel González Santiago

Miguel Ángel Tomate Hernández

Adán Málaga Olin

Carvajal Martínez Alejandra

Licenciatura en Ingeniería Biológica

Académico: Dra. Andrea Sabido Ramos

 Junio 13, 2019

1. ¿Qué placa de agar debería contener la mayoría de las colonias? ¿El menos? ¿Qué hacen estas dos las placas de control, qué nos dicen?

• La placa que en teoría deberá contener la mayoría de las colonias es aquella que se cultiva con LB, amp/ara. En cuanto a la que menos tienen, es la que contiene únicamente LB+amp, puesto que solamente van a crecer aquellas que contenga el plásmido pGLO debido a que evidentemente tendrán la proteína Ampr para metabolizar el antibiótico y serán capaces de crecer.

• Al comparar estas dos placas de control, muestran que en términos cualitativos cuantas bacterias a simple vista obtuvieron con el plásmido frente a las que no contienen el plásmido insertado.

1. ¿En qué placa (s) deben brillar las colonias bacterianas cuando se examinan con la luz UV?

• La placa que debe brillar es aquella a la que se le agregó arabinosa, debido a que esta permite la transcripción del gen GFP.

1. Una de estas placas contendrá bacterias que contienen el plásmido pGLO, pero no emitirán fluorescencia cuando se examinen con la luz UV. ¿Qué plato es este y por qué no brillan las colonias?

• La placa con LB y amp (+pGLO) serán las que no brillen bajo la luz UV, ya que al no contener arabinosa el gen GFP no se va a expresar.

1. En el tubo “-pGLO”, no había ADN presente para transformarse en las células. ¿Por qué este tubo necesita pasar por el procedimiento de choque térmico?

• El cambio brusco de temperaturas hace que la membrana sea más permeable a moléculas de ADN, lo que probablemente se traduciría a poros formados en la membrana celular. (Vargas, 2015)

Referencias

Vargas, O. 2015. Choque térmico de WorldWideScience.org. Sitio web: https://worldwidescience.org/topicpages/multi/ES/t/thermal+shock.html

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