Un espectro de absorción

INTRODUCCIÓN

En esta práctica se trabajo con 5 muestras cuyas concentraciones eran conocidas, a las cuales se les midió la absorbancia con dos instrumentos diferentes, el spectronic 20 y el fotocolorímetro de klett, para luego determinar si las muestras cumplían la ley de Lamber Beer y de ser así como lo fue en este caso, determinar a una muestra problema su concentración.

Un espectro de absorción puede servir para la identificación de una molécula porque la absorción de una longitud de onda depende de los grupos funcionales o el arreglo de átomos en la molécula. Las medidas cuantitativas en espectrofotometría son dadas a partir de la Ley de Lambert-Beer. Lambert estudió la influencia de la longitud del paso óptico en la absorbancia y encontró que guardan una relación directamente proporcional. De la misma manera Beer estudió la relación entre la concentración de la solución y la absorbancia, dando así mismo una relación directamente proporcional. De la combinación de ambos estudios surge la ley de Lambert–Beer, en la cual se establece que la absorbancia tiene una relación directamente proporcional tanto con la longitud del paso óptico como con la concentración del analito. La ley de Lambert-Beer o ley general de la espectrofotometría permite hallar la concentración de una especie química a partir de la medida de la intensidad de luz absorbida por la muestra.

Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de calibración; absorbancia (A) en función de concentración (c), para lo cual se preparan soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida. Si es válida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a diversos factores.

Resultados:

Calibración de un fotocolorímetro y espectrofotómetro para Hemoglobina

Tubo Agua ml Amoniaco (gotas) Sangre µl

1 5 2 20 µl /0,02ml

2 7 2 20 µl /0,02ml

3 8 2 20 µl /0,02ml

4 10 2 20 µl /0,02ml

5 12 2 20 µl /0,02ml

Tubo UK/ A

(Klett)

Filtro Verde Absorbancia(A)

(Spectronic)

Longitud seleccionada: 540nm Transmitancia (T) Concentración

(mg%) Factor de Calibración

(Spectronic) Klett Spectronic

1 210 ±2 0,58 26 15,60 0,07 26,4

2 175±1 0,45 35 11,14 0,06 24,8

3 150±1 0,39 41 9,76 0,07 25,0

4 109±1 0,31 49 7,80 0,07 25,2

5 100 ±1 0,26 25 6,50 0,07 25,0

Concentración (mg%) = mls solución patrón * Concentración de solución patrón (mg%)

V solución total

Hemoglobina patrón: -------15,60mg% Concentración patrón.

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