Uso Del Termociclador Para PCR

USO DE TERMOCICLADOR PARA PCR

Fundamentos

La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) consiste en la amplificación de fragmentos de DNA mediante el uso de la enzima DNA polimerasa. Esta enzima tiene capacidad para sintetizar nuevas cadenas de DNA mediante la incorporación de bases nucleotídicas, a partir de una secuencia corta conocida (oligo, cebador o primer) que híbrida de forma complementaria con uno de los extremos de la hebra. El crecimiento de la nueva hebra se realiza en sentido 5’ a 3’.

Los actuales termocicladores son capaces de realizar rápidos cambios de temperatura que permiten realizar los tres pasos de la reacción de PCR de forma cíclica: desnaturalización del DNA, alineamiento o unión del cebador con la secuencia de DNA complementaria y extensión de la cadena.

Aplicaciones

La PCR tiene multitud de aplicaciones, tanto en investigación básica como en aplicada:

• La PCR de punto final permite detectar y controlar fragmentos de ADN de interés (técnica de clonaje, recombinación dirigida, etc.).

• Medicina: Como herramienta de diagnosis, como por ejemplo, el genotipado de especies que provocan un determinado cuadro infeccioso y en el diagnóstico de enfermedades hereditarias presentes en el genoma.

• Paleontología, antropología biológica y ciencias forenses: permite recuperar las escasas cantidades de DNA que aun no se ha degradado.

• Estudios evolutivos: establecimiento de relaciones filogenéticas de diferentes especies vegetales, animales y microorganismos.

Equipamiento

• Termocicladores GeneAmp PCR System 2400. Perkin Elmer (con capacidad para 24 muestras)

• Termociclador GeneAmp PCR System 9700. Applied Biosystems (con capacidad para 96 muestras)

• Termociclador GeneAmp PCR System 2720 Applied Biosystems (con capacidad para 96 muestras)

• Termociclador GeneAmp PCR System 9800Fast Applied Biosystems (con capacidad para placas de 96 muestras)

Requisitos del uso

Los usuarios deberán ponerse en contacto, con la debida antelación, con el personal técnico para la reserva del equipo. Las tareas de secuenciación llevadas a cabo en la unidad tendrán preferencia sobre el uso del termociclador.

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