Verificar la calidad de la coloración de Gram, mediante el uso de cepas controles de afinidad tintorial, morfología y disposición conocida.

CONTROL DE CALIDAD COLORACION DE GRAM

OBJETIVO

Verificar la calidad de la coloración de Gram, mediante el uso de cepas controles de afinidad tintorial, morfología y disposición conocida.

FUNDAMENTO

Técnica de la tinción de Gram se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína). Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas.

Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.

EQUIPOS Y /O RECURSOS

Materiales y herramientas

• Mechero
• Portaobjetos
• Pipeta Pasteur
• Asa de siembra
• Microscopio

Equipos

• Microscopio

Medios y reactivos

• Alcohol
• Cristal violeta
• Lugol
• Alcohol Acetona
• Safranina

Biologicos

• Cepa ATCC de Staphylococcus aureus
• Cepa ATCC de Escherichia coli

PROCEDIMIENTO

En un portaobjetos bien limpio (con alcohol y flameado) se coloca una gota de agua destilada a la que con el asa de siembra, previamente esterilizada a la llama, se lleva una pequeña cantidad de suspensión de bacterias, de una colonia. Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el portaobjetos  y se fija la extensión por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque.

1. Teñir con cristal violeta agregando suficiente colorante y dejar  que actúe durante 1 minuto.
2.  Lavar suavemente con agua.
3. Inundar suavemente con Lugol y dejar actuar durante 1 minuto.
4. Lavar suavemente con agua.
5. Decolorar con alcohol acetona por 30 segundos.
6. Lavar suavemente con agua.
7. Agregar la safranina, por 1 minuto.
8. Lavar suavemente con agua.
9. Secar la preparación y examinar al microscopio

RESULTADOS

Gram positiva: Cepa ATCC de Staphylococcus aureus

Gram negativa : Cepa ATCC de Escherichia coli

CONTROL DE CALIDAD PRUEBA DE LA OXIDASA

OBJETIVO

Evaluar la calidad de los reactivos utilizados en la prueba de la Oxidasa, la calidad en el procesamiento de la técnica, así como la interpretación de los resultados; mediante el uso de cepas controles, de comportamiento conocido y estandarizado.

FUNDAMENTO

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa que activa la oxidación del citocromo que es reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromo oxidasa sólo se encuentra en los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo, pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.

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