EXTRACCIÓN DE ADN

EXTRACCIÓN DE ADN

OBJETIVO:

El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.

1. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra replegado.

MATERIAL:

• Hígadito de pollo

• Varilla de vidrio

• Mortero

• Vasos de precipitado

• Pipeta

• Probeta • Alcohol de 96°

• Cloruro sódico 2M

• SDS

• Arena

• Trocito de tela para filtrar

TECNICA:

1. Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se puedan romper las membranas de y queden los núcleos sueltos. FIGURA 1

2. Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o puré. FIGURA 2

FIGURA 1

FIGURA 2

3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper. FIGURA 3

4. Medir el volumen del filtrado con una probeta. FIGURA 4

FIGURA 3

FIGURA 4

5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. FIGURA 5

6. A continuación se añade 1 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas, tipo Mistol o similar. Yo uso mistol y me va bien). La acción de este detergente es formar un complejo con las proteinas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteinas que tiene asociadas. FIGURA 6

FIGURA 5

FIGURA 6

7. Añadir mediante una pipeta 50 centrímetros cúbicos de alcohol de 96:. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN. FIGURA 7

8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. En la fotografía número 9 se indica con mayor precisión las capas. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN. FIGURA 8

FIGURA 7

FIGURA 8

FIGURA 9 Esta práctica puede completarse con una tinción específica de ADN.

Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla de vidrio y depositarlas sobre un porta.

Teñir durante unos minutos con un colorante básico.

Observar al microscopio.

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