Extraccion De Adn

Laboratorio 6 de bioquímica

Aislamiento del ADN a partir del Bazo de Cerdo

Extracción de ADN de Tejido Vegetal

Profesora: Albertina Montenegro

Integrantes: Roger Chávez; Fany Solís

8 de octubre de 2012

Objetivos:

• Extraer ADN del Bazo de cerdo.

• Preparar un amortiguador salino.

• Extraer ADN de una banana.

• Diferenciar entre la extracción de ADN de tejido animal y de tejido vegetal.

• Poner en práctica otro procedimiento para la extracción de ADN.

Marco teórico:

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas:

En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen.

La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

Citado en:

http://www.educa.madrid.org/web/ies.antoniogala.mostoles/dep_bio_archivos/extraccion_de_adn.pdf.

El ADN es la sustancia química donde se almacenan las instrucciones que dirigen el desarrollo de un huevo hasta formar un organismo adulto, que mantienen su funcionamiento y que permite la herencia. Es una molécula de longitud gigantesca, que está formada por agregación de tres tipos de sustancias: azúcares, llamados desoxirribosas, el ácido fosfórico, y bases nitrogenadas de cuatro tipos, la adenina, la guanina, la timina y la citosina.

Los azúcares y los ácidos fosfóricos se unen lineal y alternativamente, formando dos largas cadenas que se enrollan en hélice. Las bases nitrogenadas se encuentran en el interior de esta doble hélice y forman una estructura similar a los peldaños de una escalera. Se unen a las cadenas mediante un enlace con los azúcares. Cada peldaño está formado por la unión de dos bases, formando los pares de bases anteriormente mencionados; pero estos emparejamientos sólo pueden darse entre la adenina y la timina o entre la citosina y la guanina. Las secuencias -el orden en que se van poniendo- que forman adenina, timina, citosina y guanina a lo largo de la cadena de ADN es lo que determina las instrucciones biológicas que contiene.

Citado en: http://mc2coruna.org/domus/genetica/html/adn.html.

Materiales:

 Vasos químicos (50 o 100mL)

 Tubos de ensayo

 Probetas de (10- 50-100mL)

 Balanza

 Gotero

 Licuadora

 Centrifugadora

 Papel filtro

 Shampoo

 Pipeta

 Varilla de vidrio

 Palillos

Reactivos:

Sustancia Propiedades físicas y químicas Toxicidad

Cloruro de sodio Solido blanco cristalino higroscópico. Soluble en agua. Por ingestión: peligroso en grandes cantidades. Por inhalación: puede producir irritación. Contacto con piel y ojos: produce irritación y resequedad.

Etanol Líquido incoloro, volátil, con un olor característico y sabor picante. Por inhalación: produce irritación del tracto respiratorio superior. Contacto con ojos: causa irritación. Contacto con la piel: produce dermatitis caracterizada por resequedad y agrietamiento.

Éter etílico Liquido incoloro con olor característico. Por inhalación: causa náuseas, vómitos, dolor de cabeza y pérdida de conciencia. Contacto con ojos: los irrita levemente. Contacto con la piel: produce resequedad.

Cloroformo Liquido incoloro de olor característico. Por inhalación: tos, somnolencia, dolor de cabeza. Contacto con la piel: enrojecimiento, dolor. Por ingestión: dolor abdominal, vómitos.

Citrato de Sodio Polvo blanco, solido, soluble en agua. Peligroso en caso de inhalación, la sustancia es toxica para las membranas mucosas. Peligroso en caso de ingestión. Irrita la piel y los ojos.

Bazo de Cerdo

Banana

Procedimiento:

Aislamiento del ADN a Partir del Bazo de Cerdo

Amortiguador salino: NaCl 0,15M, amortiguado con citrato de sodio 0,015M a pH7.

-Picamos con la ayuda de un cuchillo los 50g de bazo de cerdo y luego lo mezclamos con 100 mL de amortiguador. Se licuó por un minuto.

-Centrifugamos a una velocidad de 5000 rpm por 15 minutos, luego se decantó.

-Homogenizamos y añadimos 100 mL de amortiguador.

-Se centrifugó por 5 minutos más. Se decantó.

-Añadimos 100 mL de NaCl al 2M y se volvió a centrifugar por 15 minutos.

- El Sobrenadante le agregamos una doble cantidad de alcohol al 95%.

- Se extrajo el ADN y lavamos lo obtenido con etanol al 80 % y lo guardamos en una mezcla de amortiguador/agua 1:10.

Extracción de ADN de tejido vegetal

A. Mezclamos una banana con 200 mL de agua en frio. Se licuó por un minuto.

B. Se agregó una cucharada de shampoo con sal y 20 mL de agua.

-Se mezcló 50 mL de A + B por 5 minutos.

-Se filtró y se añadió alcohol.

-Se dejó reposar por 3 minutos.

-Se separó el ADN con un gotero y se guardó.

Resultados:

Extracción de ADN de tejido animal

Muestra Observación

Aquí se observa los filamentos formándose al agregar el alcohol a la solución de bazo que preparamos. El ADN tiene apariencia de una sustancia mucosa blanca y filamentosa. El ADN precipito por el alcohol y también separa el ADN de otros componentes celular, los cuales son dejados en la solución acuosa.

 La cantidad de ADN en las células de una especie determinada es constante y se encuentra casi exclusivamente en el núcleo de la célula. Es importante tener en cuenta este factor y contar con una buena fuente para poder obtener buenos resultados.

 Esta fuente debe tener baja actividad de la enzima desoxirribonucleasa, ya que degrada al ADN e hidrolizar al ADN altamente polimerizado quebrando los enlaces fosfodiester, preferencialmente

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