ClubEnsayos.com - Ensayos de Calidad, Tareas y Monografias
Buscar

Su objetivo es obtener un gran número de copias de DNA partiendo de un mínimo.u


Enviado por   •  9 de Abril de 2018  •  Documentos de Investigación  •  366 Palabras (2 Páginas)  •  125 Visitas

Página 1 de 2

Técnica

 Características

Ventajas

Desventajas

Aplicaciones

PCR Punto Final

Su objetivo es obtener un gran número de copias de DNA partiendo de un mínimo.

Necesitamos:

  • Polimerasa
  • Primers (Fw y Rv)
  • Agua
  • Buffer
  • dNTP´s
  • DNA molde

Es más económica en comparación a otras técnicas de PCR.

La amplificación del gen de interés puede ser poco especifica

- Detección de mutaciones

- Identificación de cadáveres

- Pruebas de paternidad

- Investigación científica

- Diagnóstico de enfermedades genéticas e infecciosas

PCR Anidada (nested)

Su objetivo es incrementar la sensibilidad de detección y especificidad, y se llevan a cabo dos rondas de amplificación.

Se utilizan dos pares de primers (externos e internos)

Más especifica que PCR punto final

Aumenta la posibilidad de que la reacción se contamine.

No es posible cuantificar la muestra

- Diagnóstico de enfermedades genéticas o infecciosas

- Detección de mutaciones con mayor especificidad

- Investigación cientifica

PCR Múltiple

Se utiliza cuando se desea amplificar más de dos fragmentos en la misma muestra

- Se utilizan más de dos pares de primers (cada par, para cada fragmento en específico que se desea amplificar)

- Mayor eficiencia

- Indicación de la calidad y cantidad de la plantilla

- No compromete la utilidad del experimento

- Ahorro de tiempo y esfuerzo

- Difícil optimización.

- Aumenta el costo

- Hibridación cruzada

- Unión de primers a fragmentos incorrectos

- Identificación de mutaciones

- Identificación de patógenos

- Detección de RNA

- Estudios Forenses

PCR Hot Start

Se utiliza cuando se necesita que sólo se amplifique el fragmento de interés (amplificación específica).

La reacción comienza cuando la temperatura es de 95°C , por el uso de anticuerpos, antipolimerasa, separación de los reactivos con cera o agregando la polimerasa después del periodo de calentamieno.

- Evita que los cebadores se unan a secuencias de plantillas no correspondientes.

- No se unen los primers entre si

- Aumenta la sensibilidad y rendimiento de la amplificación del fragmento de interes.

- El costo aumenta en comparación con el uso de PCR punto final.

- Se puede contaminar la reacción al agregar los primers, después del periodo de calentamiento.

- Identificación de patógenos

- Detección de mutaciones

- Identificación de cadáveres

- Investigación científica

PCR Touchdown

Esta técnica se utiliza cuando no es bien conocida la secuencia o el primer.

Útil en plantillas difíciles de amplificar.

-Útil cuando la complementariedad entre los cebadores es incierto.

- Aumenta la sensibilidad, especificidad y rendimiento.

- No se conoce cual es la tempreatura adecuada para la alineación.

...

Descargar como (para miembros actualizados) txt (3 Kb) pdf (55 Kb) docx (12 Kb)
Leer 1 página más »
Disponible sólo en Clubensayos.com