DETERMINACIÓN DE GLUCOSE EN SANGRE

INTRODUCCIÓN

El análisis de glucosa puede ser diagnósticamente importante en la diabetes, hipoglucemia y diversos trastornos suprarrenales e hipofisarios. Los métodos enzimáticos para la determinación de glucosa fueron descritos por primera vez por Keilin y Hartree (Keilin, D. 1948).

La FDA de Estados Unidos ha propuesto como método de referencia para la determinación de glucosa un procedimiento totalmente enzimático que emplea hexocinasa y glucosa-6- fosfato deshidrogenasa (Passey, R. 1977).

La glucosa es oxidada a D-gluconato por la glucosa oxidasa (GOD), con formación de peróxido de hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD), el fenol y la 4- aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno, formando una quinonaimina roja proporcional a la concentración de glucosa en la muestra. (Trinder, P. 1969).

 Mediante el presente, establecimos un posible diagnóstico de glucosa en la sangre o control de rutina de glucosa en un paciente

OBJETIVO:

Capacitar al alumno para que conozca, maneje y determine el valor de la glucosa en sangre, utilizado en análisis objetivo para la deducción de un resultado real.

DETERMINACIÓN DE GLUCOSE EN SANGRE

Todos los métodos y técnicas son válidos por lo tanto cada prueba se realiza con su respectivo método. se determina sea con suero, plasma y sangre total. 

Métodos:

• Enzimático: 10 ul + 1 ml de reactivo (glucosa-biosistem), se deja en baño maría 5 minutos a 37°C y se lee en espectrofotómetro a 500 nm contra blanco de reactivo.
• Glucometria: se toma una muestra de sangre capilar y se lee con un glucómetro.
• Glicemia preprandia: prueba donde se toma una muestra de sangre periférica con un ayuno mínimo de 8 horas v Glicemia Postprandial: prueba donde se toma muestra de sangre periférica en cualquier momento del día.
• Curva de tolerancia oral a la glucosa: se da una carga de glucosa al paciente y se toma a la hora, dos horas, 3 horas para ver la respuesta del organismo a esa carga.  
• Test O`sullivan: a una mujer entre la semana 24 y 28 de embarazo se le dan 50 gr de glucosa y se toma la prueba 2 horas después.
• Hemoglobina Glicosilada: sirve para ver el nivel de glicemia que manejo un paciente en los últimos 3 meses.
  

Procedimientos de exploración

Organizados en grupos de trabajo dispongan en la mesa los siguientes materiales y reactivos.

Principio:

La glucosa oxidasa (GOD) oxida a la glucosa en ácido glucónico y forma el peróxido hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD) el peroxido hidrógeno reacciona con el fenol y 4-aminofenazona y produce un complejo coloreado, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.

Muestra:

• Evitar muestras hemolizadas.
• Separar tan pronto sea posible las células de la sangre puesto que la glicòlisis consume la glucosa (aproximadamente 5 % por hora) y proporcionar falsamente valores disminuidos.
• La glucosa en suero es estable hasta 3 días de 2-8°C.

Estabilidad:

• Los reactivos están listos para su uso.
• Almacenar de 2-3°C y protegerlo de la luz los reactivos son estables hasta la fecha  de expiración indicada en el rótulo.
• No congelar.
• Una vez abierto los reactivos son estables por 2 meses de 2°- 8°C si se evita la contaminación.
• Mantener los frascos cerrados cuando no están en uso. No usar los reactivos en caso de turbidez.

TÉCNICA DE REALIZACIÓN

Procedimiento:

• Calibración y absorbancia del espectrómetro.

• Método: ……………………….. punto final en incremento
• Longitud de onda: …………….. 510 nm (500-520)
• Cubeta: ………………… 1 cm de vía óptica
• Temperatura: ……………. 5 -10 minutos
• Tiempo de reacción: ………….. contra reactivo blanco
• Reactivo/Muestra: ……………… 1/100

• Toma de muestra través de la venopunción o flebotomía se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La estudiante encargada de tomar la muestra utilizará guantes, una aguja (con una jeringa o tubo de extracción).

• Le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas retengan más sangre ya parezcan más visibles y accesibles.

• Limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación localizará la vena apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor. 

• Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración (mediante la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).

• Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodón o similar para favorecer la coagulación y se le indicará que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas.
• Colocar en baño maría de 5-10 min para que se coagule la muestra.

• Centrifugación de la muestra 3000 rpm 3-5 min.

• Rotular los 3 tubos de ensayo R. Blanco, Estándar y muestra.

Preparación de soluciones:

• Mezclar e incubar de 5-10 minutos a 37°C en baño maría.

• Luego leer la absorbancia del estándar (abstd) y la muestra (absm) contra el blanco de reactivo en el espectrofotómetro.
• Los volúmenes de reacción pueden ser variados proporcionalmente sin ninguna modificación en el cálculo

Resultados de Cálculos:

Calcular la concentración de glucosa en la muestra usando la siguiente fórmula:

Abs muestra /Abs estándar  x 100

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