Manejo Hplc

1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL

Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.

1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Conocer el manejo del Cromatógrafo Lachrom Elite y su importancia en la industria farmacéutica.

Identificar las partes del Cromatógrafo, su aplicación y funciones específicas de cada una de estas.

Indagar acerca de la cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) como técnica utilizada para separar, identificar y cuantificar los componentes de una mezcla.

2. INTRODUCCIÓN

La cromatografía es un método de separación que tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. La palabra cromatografía significa escribir en colores y fue denominada así por el botánico Michael Tswett quien empleó la técnica para separar varios pigmentos vegetales tales como la clorofila y xantofilas, haciendo pasar disoluciones de estos compuestos a través de una columna de vidrio que contenía carbonato de calcio finamente dividido, en donde las especies separadas aparecían como bandas coloreadas.

Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de técnicas utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias, en la separación de componentes de las mezclas y en la purificación de compuestos. Esta técnica se utiliza tanto a nivel de investigación como a nivel industrial. Este método puede variar de técnica en técnica, pero siempre se basa en el mismo principio: Todos los sistemas de cromatografía contienen una fase estacionaria y una fase móvil.

El objetivo fundamental de cualquier tipo de cromatografía es la separación de los componentes de mezclas en base a la diferencia de propiedades físicas de aquellos. Son técnicas analíticas de separación de materiales que utilizan la distribución de las sustancias entre la fase móvil y la fase estacionaria. La primera, también conocida como eluyente, de naturaleza líquida o gaseosa tiene como misión arrastrar las sustancias a través de la fase fija. En la estacionaria o fija se verifica la separación de la mezcla.

3. MATERIALES

Tabla N.1 Materiales para el reconocimiento y manejo del cromatógrafo Lachrom Elite

Cromatógrafo Líquido HPLC Lachrom Elite

Es el equipo que permite desarrollar métodos de análisis para realizar una separación sofisticada; es de alto rendimiento, precisión y sensibilidad.

Equipo de filtración de solventes

Este equipo es utilizado para la filtración y degasificación de solventes,

Contiene Botellas de filtración de gran resistencia a la alta presión. Bomba de vacío de alto rendimiento. Tiene dos tipos de bomba: de presión constante y de presión ajustable.

Columnas para cromatografía La columna de separación es el corazón del cromatógrafo. Proporciona versatilidad en los tipos de análisis que pueden realizarse. Esta característica se debe a

la amplia gama de selección de materiales para las fases móvil y estacionaria, permite

separar moléculas que difieren muy poco en sus propiedades físicas y químicas.

Membranas Filtrantes Estas membranas facilitan la filtración de soluciones acuosas y biológicas y facilitan los controles microbiológicos

3. PROCEDIMIENTO

Reconocimiento de las partes y funcionamiento del Cromatógrafo Lachrom Elite

Tabla N.2 Partes del Cromatógrafo Lachrom Elite

Depósitos para la fase móvil

Recipientes inhertes que suelen ser botellas de vidrio y tubos de teflón provistos de aditamentos indispensables para eliminar los gases disueltos y partículas que pudiera tener la fase móvil.

Sistemas de bombeo

Son necesarios para conseguir y regular la presión y velocidad del flujo de la fase móvil. Cuando la fase móvil es una mezcla de solventes, la bomba se programa para tomar los diferentes solventes en una proporción determinada.

Tipos:

Bombas recíprocas

Bombas de desplazamiento

Bombas neumáticas

Sistemas de inyección

Son válvulas dosificadoras que permiten regular la aplicación de la muestra en volúmenes de 5 a 500 µl.

Detectores de Índice de Refracción

El disolvente pasa a través de la mitad de una celda y el efluente de la columna pasa por la otra mitad.

Los dos compartimentos están separados por una placa de vidrio montada a un ángulo tal que si las dos disoluciones difieren en índice de refracción se produce una desviación del haz incidente.

Columna

Contiene a las partículas de la fase estacionaria

Columnas analíticas: están fabricadas en acero inoxidable en su interior se deposita una capa porosa de sílice, alúmina o una resina de intercambio iónico.

Precolumnas: se colocan delante de la columna para eliminar la materia en suspensión y contaminantes del disolvente, La composición debe ser semejante a la de la columna analítica.

Detectores de Absorbancia (UV VIS)

Contenido en una celda de flujo en forma de Z. Minimiza el ensanchamiento de banda extra –columna.

Otros tipos de detectores son:

-Detector de fluorescencia

-D. de índice de refracción

-D. de dispersión de luz

-Detector electroquímico

-D. por espectroscopia de masas

Sistema para el tratamiento de datos

Para registrar los cambios en alguna propiedad en función del tiempo. La representación gráfica de estos registros se llama cromatograma.

5. DICUSIÓN DE RESULTADOS

El desarrollo de la práctica realizada fue cualitativo y demostrativo puesto que el objetivo estaba dirigido a la comprensión y asimilación de los fundamentos básicos teóricos de la

...