Protocolo Experimental De Citología De Impresión

La citología de impresión de la conjuntiva es una técnica no invasiva, que permite determinar el grado de metaplasia escamosa de la superficie conjuntival. Fue utilizada por primera vez por Egbert, siendo modificada posteriormente por otros autores de acuerdo con sus necesidades. Los autores encontraron que se podía obtener una impronta de las capas del endotelio, al ejercer presión sobre la conjuntiva con un papel de filtro de acetato de celulosa

Material:

1. Papel filtro de acetato de celulosa (diámetro de poro .45µm y diámetro del filtro 25mm).

2. fórceps suaves y de punta plana.

3. Solución fijadora

4. Tinción de PAS y Hematoxilina

5. Tren de Tinción

Procedimiento:

1. Limpiar el área limítrofe al ojo y secreciones.

2. Anestesia tópica de la córnea y conjuntiva por instilación de colirio anestésico o hidrocloruro de tetracaína y oxibuprocaína.

3. A continuación, con un fórceps suave y de punta plana se toma una tira (previamente cortada y esterilizada) del papel filtro de acetato de celulosa (Millipore HAWP304) y se coloca sobre la superficie ocular a estudiar. Alisar suavemente el papel de filtro sobre la superficie ocular al tocar con las puntas del fórceps en cada una de las cuatro esquinas del papel filtro. Manteniéndose la impronta durante cinco segundos.

4. Retire el papel filtro tomándolo por la punta con pinzas y seguir una maniobra de "pelado" sobre la superficie ocular.

5. Las tiras se fijan con solución fijadora (véase anexo).

6. Se tiñen con ácido peryódico de Schiff (PAS) y hematoxilina.

7. Las muestras se deshidratan luego a través una serie graduada de alcohol.

8. Después se colocan en xilol durante 15min. para completar la deshidratación y aclarar el papel de filtro

9. Y por último se colocan permanentemente en resina con un cubre

10. Las muestras ya teñidas se estudian al microscopio óptico, prestando una especial atención al número de células epiteliales conjuntivales mucosecretoras (células caliciformes) si como al área del citoplasma y núcleo de las células no-secretoras, las alteraciones y tinción citoplásmicas, las alteraciones nucleares y la relación entre las áreas nucleares y citoplásmicas.

Nota:

Etiqueta de la hoja de Citología de Impresión con Información de la pieza; la fecha de recolección de la muestra, el nombre del paciente (apellido, nombre, inicial del segundo nombre) o número de expediente médico (si está disponible), el ojo al que se le tomo muestra y en qué área de la conjuntiva o córnea, se extrajo la muestra; esto explícito en la siguiente figura:

Corte de papel filtro:

ANEXO 1

Protocolo de tinción:

1.- Rehidración de

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