Practica 2: Esterilización Equipo verde

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Microbiología

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Practica 2: Esterilización

Equipo verde

Bañuelos García Mercedes Edith

Marín Sánchez Margarita

Jiménez Salazar Diana

Valdés Pérez Rosa Isela

Martínez García Gabriela Alejandra  

Profesor: José Tabla Pichardo

21/06/2016

1. OBJETIVOS

1. Preparar material de vidrio para esterilizar por calor húmedo.
2. Realizar un reto microbiano para evaluar la efectividad de la esterilización por calor húmedo.
3. Preparar material para esterilizar por calor seco.
4. Preparar un medio de cultivo líquido para la practica 3.
5. Preparar un medio de cultivo sólido para la practica 3.

1. INTRODUCCIÓN

A lo largo de la historia, los humanos han utilizado el fuego para esterilizar objetos. El calor generado mediante la aplicación de altas temperaturas afecta a las membranas y desnaturaliza las proteínas y los ácidos nucleicos de los microorganismos. Sin embargo, someter los objetos al fuego resulta excesivo para el uso cotidiano.

El principio de esterilización preferido para la esterilización es el calor húmedo, así que la autoclave es el método más utilizado para realizarla.

En un horno de aire seco, son necesarias dos horas a 160 0C para eliminar las esporas de la bacteria Clostridium botulinium  (relacionada con la comida enlatada). Mediante calor húmedo, se pueden eliminar las mismas esporas en solo cinco minutos a 121 0C, lo que demuestra que el calor húmedo es más eficaz que el  calor seco.

Para ser eficaces contra bacterias y virus formadores de esporas, las autoclaves deben:

• Hacer que el vapor entre en contacto directo con el material que se desea esterilizar. Por ello la carga es muy importante, no debe llenarse la autoclave arriba de ¾ partes de la capacidad.
• Crear el vacío para desplazar todo el aire presente originalmente en el autoclave y sustituirlo por vapor.
• Implementar un medio de control bien diseñado para la evaluación de la efectividad.

La eficiencia del proceso de esterilización depende de los factores principales. Uno de ellos es el tiempo que deben exponerse a los microorganismos a la temperatura indicada para acabar con ellos. El segundo factor es la temperatura a la que aparecen todos los microbios de una muestra o material.

Debido a que el costo de los materiales para el reto microbiano son relativamente costosos, no se utilizan en todas las esterilizaciones, dependiendo del laboratorio se pueden usar cada semana, cada dos semanas o cada mes. Como alternativas para monitorear la eficiencia del proceso se utilizan regularmente la medición de la presión interna de la autoclave con un manómetro calibrado y un termómetro de temperatura máxima. Otra medición que se puede utilizar  pero no es muy común, es la medición del volumen recuperado, que además puede ayudar a identificar macrófagas.

Definiciones

Métodos de esterilización alternativos

1. DESARROLLO

Parte experimental

Preparación de material

• Envuelva las pipetas y los hisopos con papel Kraft y la cinta adhesiva. Para ello coloque la pipeta sobre un rectángulo de papel Kraft de 10 cm de ancho y 10 cm más largo que la pipeta o el hisopo. Coloque la punta de 1 pipeta apuntando hacia una esquina y la doble esquina sobre la pipeta. Doble el borde largo del papel sobre la pipeta y después enrolle el papel alrededor de ella. Coloque cinta adhesiva para mantener la pipeta o los hisopos cubiertos.
• Envuelva las esponjas con el papel Kraft formando un paquete rectangular como si envolviera un regalo.
• Rotule el material.

Preparación de medios de cultivo

• Disuelva 1 gr de peptona y 0.9 gr de cloruro de sodio en 100 ml de agua dentro de un matraz Erlenmeyer.
• Coloque un tapón de gasa y algodón en la boca del matraz, y cúbralo con un sombrero de papel Kraft.
• Rotule el material.
• Disuelva la cantidad necesaria de agar cuenta en placa en 100 ml de agua destilada. Caliente hasta la disolución.
• Coloque un tapón de gasa y algodón en la boca del matraz, y cúbralo con un sombrero de papel Kraft.
• Rotule el material.

Esterilización en autoclave

• Coloque los medios de cultivos, las esponjas y los hisopos en el interior de la canastilla.
• Asegúrese que la autoclave tiene agua destilada suficiente para cubrir las resistencias.
• Cierre la autoclave, conecte a la corriente, enciéndala y gire el control de temperatura hasta el máximo.
• Asegúrese que la válvula ubicada en la tapa está abierta.
• Cuando salga vapor en una corriente continua por la válvula, ciérrela.
•  Deje que la presión llegue a 15 psi y manténgala así durante 15 minutos girando la perilla de control de temperatura a la mitad.
• Al término de los 15 minutos apague la autoclave y deje enfriar antes de sacar el material.

Esterilización en horno

• Coloque los medios de cultivo, las esponjas y los hisopos en el interior del horno a 160 0C durante 2 horas.
• Al término de las 2 horas retire el material utilizado guantes o franelas para evitar quemaduras o apague el horno y deje enfriar antes de sacarlo.

1. RESULTADOS

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