Prueba de laboratorio Tincion Diferencial

Resumen:

Lo primero que se realizó en el laboratorio fue una tinción de Gram para lo cual se utilizó tres tipos de bacterias: Klebsiella sp., Escherichia coli., Staphylococcus sp. Con el objetivo de distinguir forma y agrupación. Además de eso se realizó una tinción negativa para teñir la cápsula de Klebsiella sp., utilizando tinta china.

Materiales:

• Placas de medio de cultivo

• Asas bacteriológicas

• Mechero

• Cubeta de tinción

• Frascos lavadores

• Láminas

• Set de colorante de Gram

• Tinta China

• Microscopio

• Aceite de inmersión

• Pipetas

Métodos:

Tinción Diferencial de Gram

En el procedimiento que se desarrolló, se tomó la muestra de dos medios de cultivo sólidos los cuales contenían las bacterias: Escherichia coli, Staphylococcus sp. y un medio de cultivo líquido que contenía la bacteria: Klebsiella sp.

• En los medios de cultivos sólidos se colocó sobre una lámina una gota de solución salina (0.85%).

• Se tomó una muestra representativa del medio el cual se emulsionó con la solución salina.

• En el caso de la Klebsiella sp., ya que era un medio de cultivo líquido, se tomó una muestra representativa realizando un frotis en una lámina.

• Se procedió a la fijación de la muestras con calor directo.

• Para la respectiva coloración, se cubrieron los frotis con dos gotas de cristal violeta por 1 min.

• Se procedió al lavado con agua destilada.

• Luego se le añadió a los frotis lugol por 1 min. y nuevamente se lava con agua destilada.

• Se aplicó alcohol acetona por 30 segundos para su decoloración, e inmediatamente se lavaron con agua destilada.

• Y para finalizar se agregó safranina por 1 min., posteriormente se lavó con agua destilada y se dejó secar al aire.

• Se observaron las muestras al microscopio (100x) utilizando una gota de aceite de inmersión.

Tinción Negativa

• Se colocó tinta china al extremo de una lámina.

• Se tomó una pequeña muestra de la colonia de Kliebsiella sp. mezclándola con la tinta china.

• De la misma mezcla se tomó una muestra y se colocó en otra lámina para realizar un extendido.

• Se dejó secar al aire para su posterior observación al microscopio.

Resultados:

Escherichia coli Staphylococcus sp. Klebsiella sp.

Descripción:

Forma:

Agrupación

Discusiones:

Si no se realiza un buen procedimiento utilizando todas las medidas de bioseguridad y el mechero para esterilizar el área puede haber presencia de microorganismos en el medio de cultivo.

Por tal razón hay que ser muy cuidadosos a la hora que se está trabajando

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