PASOS DE LA INGENIERIA GENETICA

PASOS DE LA INGENIERIA GENETICA

Apuntes:

1)Obtención de la muestra: se realiza a través de células (vivas o muertas).

2)Separación de los tejidos: Hay que separar la célula de todo lo demás que compone el tejido. Se puede hacer mediante métodos físicos (ruptura con instrumentos) o métodos químicos (sustancias que se agregan al tejido y rompen las uniones químicas)

3)Centrifugación: Se ubica la muestra en un tubo de ensayo y se colocan geles que mantienen su separación, se los coloca en una centrifugadora. Aquí se separan las organelas.

4)Ultra centrifugación: Similar al proceso anterior, de aquí se extraen fragmentos más pequeños hasta la obtención de ADN. Separa a nivel molecular.

5)Fragmentación: Se fragmentan los genes que se encuentran en el ADN. Las endonucleasas son enzimas propias de las baterías que fragmentan el ADN y determinan los patrones de banda. La metionina es un aminoácido que forma parte del inicio de formación del polipéptido.

6)Electroforesis en gel: Se trata de aplicar fuerzas electromotrices para desplazar moléculas. Se realiza mediante un gel.

INFORMACION

1. Obtención de la muestra: Se puede extraer ADN de casi cualquier tejido humano. Las posibles fuentes de ADN en la escena de un delito incluyen sangre, semen, tejido de una víctima muerta, células del folículo capilar y saliva. El ADN extraído de las pruebas del delito ("indicios" o "vestigios" biológicos) se compara con el extraído de muestras de referencia, obtenidas de personas conocidas, habitualmente de la sangre.

2. Separación de los tejidos: El fraccionamiento subcelular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular. El primer paso en la purificación de la mayoría de las proteínas y estructuras subcelulares es la rotura de los tejidos o de las células para obtener un lisado celular en el que la proteína, el complejo multiproteico o la estructura subcelular se encuentre en condiciones que permitan su aislamiento. Esto se consigue empleando procedimientos mecánicos suaves conocidos generalmente como homogenización. Estos métodos producen la rotura de las membranas celulares, suavemente, con lo que se libera el contenido celular.

3. Centrifugación: La centrifugación se utiliza para separar partículas en suspensión en el seno de un líquido o partículas en disolución, siendo éste el caso donde se encuentran más aplicaciones. Así, se utiliza habitualmente en biología ya que permite separar células, orgánulos subcelulares o macromoléculas.

4. Ultra centrifugación: Una ultracentrifugadora consiste en una cámara al vacío y refrigerada que contiene un rotor, el cual es manejado por un motor eléctrico capaz de girar a alta velocidad. Esta fuerza causa la sedimentación de macromoléculas e incluso puede causar una distribución no uniforme de moléculas pequeñas. La repetida aplicación de este proceso produce un rango de capas que incluye diferentes partes de la muestra original. Algunos pasos adicionales pueden realizarse para refinar aún más cada uno de los precipitados obtenidos. (Así se llega a la obtención del ADN).

5. Fragmentación: Un enzima de restricción es aquella que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto, llamado sitio o diana de restricción, o en un sitio no muy lejano a este. El mecanismo del corte de ADN se realiza a través de la ruptura de dos enlaces fosfodiéster en la doble hebra, lo que da lugar a dos extremos de DNA. Éstos pueden ser romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados. Estos últimos

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