AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ENZIMAS

AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ENZIMAS

BRYAN S.TORRES 117-3037; IVAN D. GALEANO 117-3040; ROBERT GONZALEZ 117-2910

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES; UNILLANOS

RESUMEN:

El objetivo de esta práctica fue sembrar a partir de una muestra de material orgánico (suelo) por el método de dilución de agar leche, agar almidón y agar celulosa. Con el fin de aislar microorganismos productores de amilasa, celulosa y proteasa. Sin embargo no se obtuvieron los resultados deseados en la muestra de amilasa y celulosa.

METODOLOGIA:[pic 1]

Siembra del material orgánico (suelo) en los agares.

Se realizó la siembra pesando 10 g del material orgánico (suelo) en la balanza sobre papel filtro, después se puso la muestra de suelo en un frasco de vidrio con 90 ml de agua peptonada al 1%, se mezcló muy bien y se procedió a realizar diluciones seriadas hasta 104. Teniendo en cuenta la última dilución de 104 se realizó la siembra en superficie añadiendo 0.1ml de la dilución a cada uno de los tres agares. Estos agares se marcaron y se envolvieron en papel kraff y se       llevaron a encubar a 37°C por 48 horas.

RESULTADOS Y DISCUCIÓN:

1. En la muestra de agar leche se observó como las bacterias sintetizaron y degradaron las proteínas formando bacteria con sus halos de hidrolisis, obteniendo una colonia de bacteria debido a que las demás habían sido consumidas y solo dos con halos en las cuales su tamaño tenía una diferencia muy mínima:

1 Halo = 25mm – 17mm

Dmtotal = 8mm

2 Halo = 18mm – 7mm

Dmtotal = 11mm

Imagen 1. Agar  leche. Halo 1 círculo  grande, Halo 2 círculo pequeño.

La caseína es una proteína encontrada en la leche. Cuando la leche es mezclada con un medio de cultivo, el medio pierde su transparencia y se vuelve turbio debido a que la caseína reacciona con los iones calcio y forma complejos coloidales insolubles de caseinato de calcio. Cuando la enzima caseínasa cataliza la hidrolisis de caseína, los aminoácidos resultantes se disuelven en el medio acuoso y el medio se torna de nuevo en transparente alrededor de la colonia del microorganismo. Este fenómeno permite detectar la degradación de la proteína [1]

2.Para la muestra de almidón se agregaron gotas de Lugo para identificar las colonias que presentan halos de hidrolisis, tiñendo el cultivo de un color azul oscuro el cual se obtuvo con un total de 2 colonias con hidrolisis, presentes en la imagen 2.

[pic 2]

Imagen 2. Agar Almidón

Cuando el almidón (amilasa) es hidrolizado por la acción de exoenzimas amilasas, se degrada a maltosa y glucosa.  Estos azucares son trasportados  al citoplasma  de la célula y usados como fuente de carbono y fuente de energía [2]

El  lugol o reactivo de yodo-yoduro, tiñe específicamente el almidón en azul violeta. El color del producto puede variar según la constitución precisa del almidón y en particular, de la proporción  de amilosa y amilopectina. [3] Reaccionan químicamente cuando las moléculas de yodo se inserten en los hueco de la molécula espirilada del almidón. Este resultado es debido a que la molécula absorbe más luz visible excepto la azul . Si el almidón se rompe  en maltosa y glucosa, no se  desarrolla ningún color debido a que se desaparece  la espiral y no quedan los huecos para el  yodo . esta ausencia de color es asociada con la hidrolisis del almidón .[4]

El almidon   es una hélice  y el yodo se queda inmovilizado  en su interior , cuando  la proporción de amilo pectina  es mayor tiñe en azul, pero si es mayor la proporción de amilosa  la tinción es más roja y menos intensa.

3.   para la muestra del medio de cultivo CMC  se agregó rojo Congo para identificar las bacterias presentes, obteniendo 8 colonias y 2 con hidrolisis de un tamaño muy pequeño como se observa en la imagen 3

[pic 3]Imagen 3, medio de cultivo  CMC

Halo 1: 5mm diámetro total

Halo 2: 2mm diámetro total

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