AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ENZIMAS

AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ENZIMAS

Resumen[pic 2]

En esta práctica de laboratorio se realizó el aislamiento y selección de microorganismos mesófilos productores de enzimas que actúan como catalizadores de las reacciones químicas, de síntesis y degradación de compuestos tales como: amilasa, proteasas y celulosas presentes en tres muestras, agar almidón a 1ml de la dilución de 10ˉ⁴ , 10ˉ³ de muestra de suelo,  agar celulosa a 1ml de la dilución de 10ˉ⁴, 10ˉ³ de muestra de suelo, agar leche a 1ml de la dilución de 10ˉ⁴ , 10ˉ³ de muestra de suelo.

Éstas tienen muchas aplicaciones en diversos tipos de industrias, entre las que se destaca la alimenticia, por ejemplo en la obtención de yogurt, o la producción de cerveza o de vino, ya que el proceso de fermentación se debe a las enzimas presentes en los microorganismos que intervienen en su producción. Sin embargo, para mejorar los procesos de producción, pueden utilizarse enzimas aisladas, sin incluir a los microorganismos que las producen.

Palabras clave: enzimas, microorganismos mesófilos, amilasa, proteasas y celulasas.

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1. Introducción

Una enzima es una proteína que actúa como catalizador de una reacción química acelerándola. Las enzimas son protagonistas fundamentales en los procesos del metabolismo celular. Las enzimas unen su sustrato en el centro reactivo o catalítico, que suele estar protegido del agua para evitar interacciones no deseadas (Bonet, 1991).

En el centro reactivo la disposición espacial y los tipos de cadenas laterales de aminoácidos son fundamentales para orientar correctamente el sustrato y poder interaccionar de la forma deseada para llevar a cabo la catálisis de la reacción. Las enzimas son muy selectivas en relación a los sustratos que modifican. Las enzimas suelen ser mucho más grandes que sus sustratos y en muchas ocasiones requieren de la participación de otras moléculas más pequeñas no poli peptídicas como las coenzimas (biotina, NADH entre otros) o los iones metálicos llamados cofactores. La sustitución de los procesos químicos, por naturales, es el principio básico de la biotecnología, la cual busca reducir el impacto negativo de dichos procesos en el medio ambiente, ya que además de requerir gran inversión de capital, demandan condiciones especiales para la obtención de productos de gran interés como las enzimas; para remediar esta situación la investigación científica ha desarrollado nuevas fuentes de los productos mencionados anteriormente de origen microbiológico para contribuir en el desarrollo sostenible (Puelma, 1915).

La necesidad de acelerar los procesos con baja velocidad generó la búsqueda de alternativas para agilizarlos, dando como resultado la utilización de enzimas, principalmente obtenidas a partir de microorganismos, las cuales permiten la realización de un proceso más sencillo, la optimización del producto al generar, mayor calidad, mayor utilidad en su aplicación, mayor rentabilidad, y la obtención de un producto diferente o en mayor cantidad que sirva para compensar su reducida disponibilidad Los procesos en los cuales son necesarias las enzimas generalmente comprenden baja concentración e inestabilidad de los productos formados y obtención de mezclas complejas que impiden conseguir el producto deseado, por lo cual éste debe ser recuperado; por ello, el aislamiento de microorganismos, como recursos renovables, para su uso en la producción de enzimas es muy usual en la industria y la salud, debido a los beneficios que éstos ofrecen como estabilidad, especificidad y la aplicación general viable. (Curtis H., 2001).

1. Materiales

• Muestra de material orgánico
• Cajas de Petri con almidón, proteína y celulosa
• Erlenmeyer con 90ml de agua
• Pipeta de 10ml
• Tubos de 13 x 100 mm con 45 ml  de agua peptona da
• Perlas de vidrio estériles
• Pipetas Pasteur estériles
• Microscopio
• incubadora de 37 c
• balanza
• mecheros
• autoclave

Reactivos

• colorante de Gram
• Lugol
• Rojo Congo al 0,1%

1. Sección experimental

1. Observación de hongos algodonosos y arenosos en el microscopio.

Tomar muestras de hongos, ¿????

1. Aislamiento de microorganismos productores de enzimas amilasas, celulasas, proteasas

Pesar 10 g de la muestra de suelo, y realizar diluciones de 10ˉ¹ a 10ˉ5. Posteriormente realizar 3 siembras en superficie con 0,1 ml de la dilución 10ˉ5. Incubar a 37°C por 24-48 h. Finalmente realizar un recuento añadiendo reactivo lugol para determinar amilasas, reactivo rojo congo para dererminar celulasas y verificar zonas de aclaramiento para determinar proteasas.

1. Resultado y discusión

En esta práctica se realizaron tres respectivas identificaciones para la presencia de ADN, pentosas y fosfatos en la cebolla, (Tabla 4).

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