Actividad-catalasa

PRÁCTICA No.2 ACTIVIDAD DE LA CATALASA.

Introducción.

La Catalasa es una enzima presente en muchos tipos de células. Su función es proteger a las células del efecto tóxico del peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) producido en distintas reacciones redox. La catalasa es una enzima muy potente: una molécula de catalasa puede descomponer millones de moléculas de peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. También usa el peróxido de hidrógeno para oxidar las toxinas potencialmente dañinas del cuerpo, como el formaldehído, el ácido fórmico, alcohol y fenol. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.

Cataliza la reacción: 2 H2O2 -----------> 2 H20 + O2

Es una de las enzimas más eficientes con una velocidad de aproximadamente 200,000 transformaciones/segundo/subunidad.

Fundamento.

El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función protectora contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Esta función la efectúa esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno

Objetivo

Comprobar la actividad enzimática de la catalasa en diferentes tejidos; y el efecto de algunos iones metálicos sobre su actividad.

MATERIAL REACTIVOS

Papel absorbente (filtro) Pinzas 20 tubos de ensayo

Vasos de precipitado 1 pipeta de 2 ml Tripiè Cuchillo Termómetro de 0 100º C Tela de asbesto Mechero

Vaso de precipitados de 1000 ml

Guantes de látex

Gradilla Agua oxigenada a 3%, 200ml

Cianuro de sodio a 5%, 50 ml

Nitrato de plomo a 5%, 50 ml

Hígado de pollo o res, papa, manzana y frijol crudo macerado en seco (10 gr de cada tejido)

Agua desionizada 200 ml

Metodología.

Cortar en trozos cada uno de los tejidos usando guantes o manipulándolos con pinzas y coloque cada uno sobre papel filtro para pesarlos.

Tubo 1 de cada tejido colóquelo en el tubo y cúbralo con agua desionizada. Introdúzcalo en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos

Preparar una serie de 4 tubos para cada tejido (etiquetando cada uno de ellos y agregue lo que se indique en la tabla.

Anote sus observaciones y marque de 1 a 5 cruces, según aprecie la intensidad del burbujeo en cada tubo de acuerdo a cada tejido

Resultados.

INTENSIDAD DE BURBUJEO

TEJIDO Tubo 1 (ph)

Enzima desnaturalizada

+

substrato Tubo 2

Enzima activa

+

substrato Tubo 3

Enzima+substrato+

Inhibidor Tubo 4

Enzima+substrato

+

inhibidor

HIGADO DE POLLO No hay reacción.

x Gran intensidad de burbujeo (burbujas grandes).

xxxx Burbujeo medio.

Burbujas pequeñas.

xxx

...