Análisis práctica 5: BACILOS GRAM NEGATIVOS EXIGENTES

                           Análisis práctica 5: BACILOS GRAM NEGATIVOS EXIGENTES

LECTURA PRUEBAS BIOQUÍMICAS / AGARES

CARBOHIDRATOS:

• SACAROSA: débilmente positivas (muy)
• GLUCOSA: débilmente positiva (muy) ---> CO2 -

AMINOÁCIDOS:

• CONTROL:
• LISINA:
• ORNITINA:
• ARGININA:

TRIPTÓFANO:

• INDOL: negativo

TSI: K/K ---> H2S +

UREA: Negativo

MOTILIDAD:

CATALASA: Positivo

OXIDASA: Negativo

DNAsa: negativo

AGAR SANGRE: ---> PRUEBA DE SATELITISMO positiva

AGAR BHI (infusión cerebro, corazón):Prueba de requerimiento de factores  V y X  positiva para los dos factores

AGAR CHOCOLATE: ---> crecimiento bacteriano positivo

Los géneros que comprenden los bacilos gram negativos exigentes: Haemophilus, Bordetella, Pasteurella, Gardnerella y Brucella, tienen características bioquímicas y requerimientos nutricionales que los hacen distinguirse unos de otros

Para esta práctica de laboratorio se le asignó al grupo 3 una cepa de Haemophilus influenzae, a la cual se le realizaron varias pruebas de identificación.

“H aemophilus influenzae es el agente etiológico más frecuente de enfermedades tales como neumonía, meningitis, otitis media y conjuntivitis. La meningitis por H. influenzae se presenta casi exclusivamente en niños menores de 5 años de edad; la mayoría de los casos de enfermedad invasiva por H. influenzae es causada por microorganismos con el polisacárido capsular tipo b (Hib)” (Perilla MJ, et al 2003).

Haemophilus influenzae es un microorganismo exigente, que se caracteriza por requerir  para su crecimiento medios enriquecidos y condiciones de atmósfera especiales 5-10% CO2 , además del requerimiento de los factores X  ( hemina) y V (dinucleótido nicotinamida adenina).

  Partiendo de la tinción de Gram, en la que se pudieron observar cocobacilos Gram negativos, se procedió a realizar  la siembra en 3 agares como aislamiento primario, para esto se usó: agar chocolate, agar sangre  y agar BHI (infusión cerebro corazón), estas dos últimas donde se buscaba ver el requerimiento de factores de crecimiento por parte de este microorganismo.

En el agar sangre se llevó a cabo la prueba de satelitismo ya que Haemophilus influenzae requiere de ambos factores para su crecimiento, llas especies que  requieren NAD (factor V) y hemina (factor X) como es el caso de Haemophilus influenzae, no crecen en agar sangre a menos que sean hemolíticos y puedan liberar el NAD y hemina de los glóbulos rojos, sin embargo, crecen bien en agar sangre cerca de colonias de estafilococos (se usó staphylococcus aureus) los cuales son capaces de proveer el factor V, la cual es una coenzima que participa en las reacciones de oxido reducción del metabolismo celular la cual está presente en los glóbulos rojos . El NAD y la hemina  se difunden en el medio alrededor de la cepa de Staphylococcus aureus y estimulan el crecimiento de Haemophilus  en la zona adyacente, esto es conocido como satelitismo; En la práctica fue posible la visualización de en el agar observando pequeñas colonias no solo en la zona de hemólisis del Staphylococcus sino que también en el resto del agar.

En el agar chocolate se observó crecimiento de Haemophilus influenzae ya que los factores de crecimiento se encuentran libres en el medio, además en el agar BHI se realizó la prueba de requerimiento de factores X y V, que se basa en determinar la dependencia de los factores X y V mediante la utilización de discos impregnados con estas substancias que se ubican en el agar luego de haber hecho siembra masiva, la especie Haemophilus influenzae presentó requerimiento de ambos factores ya que creció alrededor de los discos y en el resto del agar, lo cual concuerda con el esquema establecido para la identificación de este microorganismo.

Las pruebas para catalasa y oxidasa fueron positiva y negativa respectivamente , lo que indica la presencia de la enzima catalasa que hidroliza el peróxido de Hidrógeno en agua y oxígeno, se utilizó peróxido de Hidrógeno que al estar en contacto con la bacteria género burbujas, por el contrario hay ausencia de la enzima citocromo oxidasa que transfiere hidrógeno al oxígeno, participando en el proceso respiratorio, se visualizó al no haber ninguna variación del color de la colonia al utilizar el reactivo de kovacs.

Otras de las pruebas que se le realizaron a la cepa fue la DNAsa, esta prueba estudia la presencia de la enzima DNasa la cual va  a despolimerizar el ácido desoxirribonucleico; para esto se usó un control negativo ( E. coli) y un control positivo (Staphylococcus aureus) y la lectura se puede detectar mediante el agregado de HCl 1N. En la lectura de la prueba se pudo observar turbidez por consiguiente el resultado fue negativo, no hay presencia de la enzima DNAsa.

Se realizó la prueba de la urea, en este medio se observa la capacidad de la bacteria de degradar la urea por acción de la enzima ureasa. Al poseer la enzima ureasa esta degradará la úrea y como producto se obtiene amoniaco y carbonato de amonio, que alcalinizan el medio por lo cual el medio vira a un color fucsia de lo contrario el medio permanecerá amarillo. Este medio tiene como Indicador: rojo de fenol. La lectura de la prueba fue negativa dado que el tubo mantuvo un color amarillo.

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