BIOTECNOLOGIA DE ANIMALES SEMEN CONGELADO

BIOTECNOLOGIA DE ANIMALES

SEMEN CONGELADO

• Volumen, numero, concentración
• Motilidad progresiva
• Morfología
• Integridad del acrosoma integridad del ADN
• Actividad mitocondrial
• Integridad de la membrana

Cada especie tiene un volumen de eyaculado, cuantos espermatozoides hay en unidad de volumen expresado en ml

Concentración: espermatozoides sobre volumen= total de espermatozoides obtenidos

Ejercicio:

DATOS:

• Concentración: 10 a la 6
• Volumen: 3ml

¿Cuántos espermatozoides produjo el eyaculado?

Tomando en cuenta que el animal eyacula tres veces por semana y asumiendo que todas las veces es igual. Cuantos dólares gano si cada pajuela cuesta 20 dolares.

Motilidad masal: entre todos forma remolinos

Motilidad individual: mov rectilineo uniforme

Si es que el 30 a 50% de motilidad se puede congelar y utilizar si es menos que esto no.

Escala de vigor

[pic 1]

• Se habla de azul tripan para colorante vital, si es que una célula esta viva o muerta. La célula muere cuando se daña la membrana celular. Si sufre de manera irreversible se muere.

COLORANTES DE SUPERVIVENCIA

• Algunos colorantes que se pueden usar para saber que células están muertas:

• Nigrosina eosina : muertos son rosados, vivos blancos
• Azul tripan : muertos son azules, vivos rosas
• Microscopio de florecencia y se coloca bromuro de propidio los muertos son tomates vivos verdes

[pic 2]

MORFOLOGIA

• Normales: espermatozoides diferentes que son normales
• Anormales o atipias

No pueden haber mas de 30% de espermatozoides anormales. Si esto ocurre el semen no vale para inseminación.

ALGUNAS ATIPIAS COMUNES: Existen dobleses de la cola , Colas partidas, cabezas periformes, doble flagelo, doble cabeza

CASA: Computer assisted sperm analysis

Se conecta el microscopio a la computadora y un programa calcula la motilidad progresiva, concentración, morfología.

Estos quipos son caros

INTEGRIDAD DEL ACROSOMA

• Acrosoma tiene enzimas proteicas
• Si el acrosoma suelta las enzimas antes de tiempo, el semen es malo y no vale.
• El acrosoma es integro cuando la flueorecencia sale negativo en la cabeza del espermatozoide.
• Lectina fluorecente: sustancia que esta en plantas que se pegan para las células
• Pisum sativum + FITC = flueorecencia que se une a el acrosoma
• La forma barata es el Giemsa. Que es un colorante que sirve para el mismo fin. Sanos son los que tienen acrosoma
• Un esperma recién descongelado debe tener el 50% mínimo de acrosomas intactos
• Después de dos horas mínimo el 35%
• El epidídimo secreta antibioticos naturales para que las bacterias no se dañen
• En la cola del epipidimo los espermatozoides están inmóviles ya que hay una sustancia que no les permiten moverse

INTEGRIDAD DEL ADN

• Función del espermatozoide es llevar información genética.
• Si el semen tiene adn dañado no se pueden reproducir
• Se necesita saber que el adn esta integro
• Un adn roto o fragmentado esta mal
• Esto se puede medir
• Costoso: florecencia: verde es normal y no degradado; rojo es un adn dañado
• El azul mc quilven, colorea de azul intenso el núcleo de los espermas que están fragmentados

INTEGRIDAD MITOCONDRIAL

• Las mitocondrias deben estar bien
• Debe haver un correcto potencial de acción (iones a traves de la membrana) bomba sodio potasio que crea impulsos.
• -70 milivoltios
• Cuando el potencial cae la mitocondria se daña
• Colorante JC1: tiñe de naranja a las mitocondrias dañadas
• Cuando las mitocondrias no están dañadas se tiñen de color verde
• Se puede ver el nivel de energía
• Fijar un espermatozoide con formol y usar rodamina
• Mico tracker sin fijación ósea sin matar los espermatozoides. Se pueden hacer seguimientos. Normalmente si se tiñen se sabe que están bien

INTEGRIDAD DE LA MEMBRANA

• Prueba funciomal con hiposmolaridad HOS= Hyposmotic shock
• Se ve en vivo sin matar a las células
• Se ve quien tiene la membrana bien
• Por medio de osmosis, el liquido se pasa de mayor a menor concentración
• Se busca que el espermatozoide se llene de esto y se inchan si están en buenas condiciones
• Si es que no se inchan significa que la membrana esta muerta

Embriología general

• Fecundación
• Desarrollo embrionario
• Desarrollo fetal

Rumiantes y perros la eyaculación es en la vagina

Cerdos es en el útero

Caballos en el cuerpo de útero

Esto hace diferencia. El lugar de deposición de semen

La duración de copula varía entre especies también:

El volumen de eyaculado también depende de la copula

[pic 3]                                [pic 4]

MORFOLOGIA DEL ESPERMATOZOIDE

• Cabeza
• Pieza intermedia
• Flagelo

Cuando los espermetozoides cuando llegan al tracto de la hembra tienen que esperar a pasar a la capacitación. Es como un entrenamiento que hace que se activen. Son cambios químicos. Tienen que pasar un tiempo dentro del tracto de la hembra. Depende de donde eyacule el macho ocurre la capacitación.

OVULACION

• Mientras los espermatozoides llegan, tienen que ocurrir la ovulación.
• Floliculo pre ovulatorio
• Ovulatorio
• COC (complejo de ovocito cumulus) en el oviducto (ovocito+ complejo de la granulosa)

Transporte retrograda: el 60% del espermatozoide se pierde, solo el 40 se queda adentro

Cada especie tiene una amanera de compensación para este flujo retrograda

• Cerdo: eyacula en tres fracciones. F1 No esperma F2: espermatozoides en concentraciones altas F3: Glándulas bulbouretrales.
• Caballo: JETS. J1 Espermatozoides altos. Demás tienen plasma seminal viscoso
• Perros: fracciones 3. F1: Fluido prostático. F2: mucha concentración. F3: flujos prostatales sale a presión muy velocidad, 8ml
• Toro: solamente va en una fracción

Para la capacitación se deben quedar en la vagina. Existen los reservorios de espermatozoides donde se quedan hasta que se reciban la capacitación. Les da tiempo para capacitarse

Las abejas se reproducen por la abeja reina, que hace una danza nupcial. Los sanganos tratan de aparearse. Varios logran aparearse y luego mueren. La hembra en el útero almacena el semen de todos los machos y crean los huevos. Usan un espermateca ya que escojen con que semen reproducirse

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