Biologia Molecular

PRACTICA NO 2 EXTRACCION DE ADN

1. INTRODUCCION

Las características de un organismo están especificadas en su información

genética, la cual está representada como una secuencia de ácidos nucleicos,

donde la suma total de esta secuencia es lo que conforma su genoma.

Quizás de los procedimientos en biología molecular, el más básico es la

purificación de ácidos nucleicos, en la forma de ADN o ARN. Por lo tanto se

requieren métodos seguros para la separación de estos componentes de las

células. Para lograr esto, se utilizan diversos métodos de extracción dependiendo

del tipo de tejido a emplear, fresco, seco o congelado.

2. OBJETIVOS

· Identificar las etapas indispensables en los protocolos de extracción de

ADN

· Comparar varias técnicas de extracción de ADN

· Realizar un procedimiento modelo para la obtención de ADN

3. MARCO TEORICO

El primer paso en cualquier protocolo de separación es el rompimiento del material

inicial, ya sea de origen viral, bacteriano, vegetal o animal. El método utilizado

para romper la célula debe ser tan leve como sea posible con el fin de causar el

menor daño posible al ADN. La lisis celular se puede hacer por acción mecánica,

pulverizando el tejido con hielo seco o nitrógeno líquido, también se puede utilizar

la degradación enzimática de la pared celular (si está presente) y lisis con

detergentes de las membranas celulares. Seguido al rompimiento celular la

mayoría de métodos involucran una desproteinización, lo cual se lleva a cabo con

un solvente orgánico, seguido de una precipitación con isopropanol o etanol y

posterior solubilización con agua o tampón.

Existen diferentes técnicas para la extracción del ADN, aunque todas conservan el

uso de los mismos principios y fundamentos.

Para obtener ADN a partir de leucocitos totales (obtenidos de sangre periférica),

células en cultivo, tejidos animales, vegetales, levaduras y bacterias; se usa

generalmente una técnica de cuatro pasos secuenciales:

· El primer paso consiste en la lisis de las células y los núcleos.

· Luego, la separación del ADN a partir de sangre total involucra la lisis de

eritrocitos, seguida por una lisis de leucocitos y de sus núcleos.

· Las proteínas celulares son entonces removidas por un paso de

precipitación salina, y

· Finalmente el ADN genómico es concentrado por precipitación con

isopropanol.

El ADN purificado por medio de este proceso, está listo para ser utilizado en

diferentes aplicaciones, las cuales involucran: amplificaciones (PCR), digestión

con endonucleasas de restricción, Southern blot y Dot blot.

Existen otras técnicas

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