Bioquimica

REACCIONES DE PRECIPITACION DE PROTEINAS

A. OBJETVO

• Realizar la precipitación de proteínas por acción de reactivos químicos .

• Analizar las diferentes precipitaciones de proteínas por los diferentes métodos .

B. FUNDAMENTO

Las proteínas son macromoléculas que resultan de la unión de moléculas polipectidicas de aminoácidos , son solubles en agua , en sales diluidas , en diluciones acuosas de sustancias polares siendo esta una propiedad importante de las proteínas dependiendo de la secuencia de aminoácidos .

El proceso de dilución de las proteínas esta íntimamente ligado con la hidratación de sus macromoléculas de modo que cualquier factor que altere esta propiedad , disminuirá la solubilidad de las proteínas en el agua , favoreciendo la precipitación de estas .

La disminución de la hidratación de las partículas coloidales de las proteínas se produce cuando se agrega a sus diluciones sustancias deshidratantes , como el alcohol , acetona , diluciones de sales neutras de metales alcalinos , etc. . Estas sustancias precipitan las proteínas sin el fenómeno de desnaturalización , mientras que las sales de metales pesados , ácidos fuertes o débiles y taninos precipitan a las proteínas pero la desnaturalización .

El fundamento de este fenómeno consiste en la perdida de las propiedades hidrofilias y la adquisición de propiedades hidrofobias con la perdida d la carga eléctrica .

C. MATERIALES

 Gradilla con tubos de ensayo

 Pipetas

 Probeta

 Embuto ,bagueta , goteros

D. REACTIVOS

 Clara de huevo al 50% de diluciones y filtrado .

 Soluciones de sulfato de amonio saturado y sobresaturado .

 Solventes orgánicos (etanol y acetona )

 Ácidos fuertes (acido clorihidratado , sulfúrico , nítrico )

 Soluciones al 5% de metales pesados (nitrato de plata , acetato de plomo )

 Cloruro de sodio al 0.9%

 Reactivo de Biuret.

PRECIPITACIONES DE PROTEINAS CON SULFATO DE AMONIO

FUNDAMENTO

A precipitación reversible de las proteínas se logra por adición de diluciones de sales neutras de metales alcalinas o sales amionicas , por ejemplo sulfato de amonio , cloruro de amonio , cloruro de sodio , etc. .

Las albulinas tales como ovoalbúmina , albulina sérica y lacto albulina son fácilmente solubles en agua y en soluciones salinas diluidas . Las globulinas son también solubles en soluciones salinas pero insolubles en agua .

Los precipitados de la proteína obtenidos por salificación pueden ser disueltos de nuevo el disminuir la concentración de sales mediante disoluciones acuosas . De este modo la salificación de las proteínas es un proceso reversible .La salificación de proteínas con (NH4)2SO4, semisaturado precipitan globulinas, mientras que con una saturación absoluta precipitan albulinas.

PROCEDIMIENTO.

Medir en un tubo de ensayo 2 a 3 ml de dilución de proteínas (clara de huevo )

Añadir igual volumen de solución saturado de sulfato d amonio, para observar la precipitación de globulinas.

Filtrar el precipitado y en el filtrado añadir sulfato de amonio cristalizado hasta precipitación completa de las albulinas.

Volver a filtrar y en filtrado hacer la reacción de Biuret .

En los precipitados probar la solubilidad reversible de las proteínas con agua y con NaCL al 0.9%.

PRECIPITACION DE PROTEINAS CON IONES DE METALES PESADOS

FUNDAMENTO

Bajo la influencia de los iones de metales pesados (plomo, oro , plata, mercurio ,etc ) las proteínas se coagulan irreversiblemente . Los iones de sales de metales pesados forman con las proteínas complejos esables .

Además , los metales pesados aulan la carga eléctrica y alteran la estructura secundaria , terciaria, y cuaternaria de las proteínas .

Con un exceso de sales de metales pesados el precipitado formado se disuelve .

PROCEDIMIENTO

En dos tubos de ensayo medir 2 a 3 ml de disolución de proteínas .

En uno de los tubos agregar gota a gota acetato de plomo al 5%.

En el otro tubo añadir goa a gota nitrato de plata al 3%.

A los precipitados agregar exceso de las sales y observar si ocurre la disolución del precipitado

PRECIPITACION DE PROTEINAS CON ACIDOS FUERTES .

FUNDAMENTO

Los acidos fuertes como : acido sulfúrico ,acido nítrico y acido clorhídrico concentrados causan precipitación irreversible de las proteínas , debido a la deshidratación de las proteínas y la perdida de carga .

PROCEDIMIENTO

En tres tubs de ensayo agregar 1 ml desolucion de proteína.

Enseguida añadir 1 ml de acido sulfúrico , nítrico y clorhifrico en contacto de los liquidos aparece un precipitado de proteínas en forma de pequeña circulo blanco .

PRECIPITACION DE PROTEINAS CON SOLVENTES ORGANICOS .

FUNDAMENTO

Los disolventes organicos como el etanol , acetona y otros , precipitan las proteínas debido a que ejercen un desplazamiento de proteínas de las diluciones acuosas , esto se aplica por la deshidratación de las micelas de las proteínas .El precipitado proteico puede ser nuevamente solubilizado en medio acuoso .

PRCEDIMIENTO

En dos tubos de ensayo se miden 1-2 ml de disolución proteica .

Agregar a uno etanol al 90% y al otro acetona , mezclar y se observara un precipitado de proteínas .

E. CUESTIONARIO

REACTIVOS Reacción Característica Biuret

(NH4)2SO4 saturado Precipitación de las globulinas Que las albulinas son fácilmente solubles en agua y se observa una precipitación no tan notable Tiende a un color lila

(NH4)2SO4 sobre saturado Precipitación de albulinas Se percibe mucho mas a diferencia del (NH4)2SO4 saturado porque se nota claramente la precipitación Tiende a un color lila

HCl

H2SO4

HNO3 Precipitación Con H2SO4

Se precipitan omo tambien con el reactivo de HNO3que se precipitan Tiende a un color triptofajorojo

AgNO3 5%

Pb(CH3COO)2 Precipitación Se observo que se forma un presipitado en los dos tubos solo que el que se le agrego AgNO3 el precipitado es poco denso y blanco claro, en el tubo que se agrego el Pb(CH3COO)2 el precipitado sigue siendo lechoso peso mas denso que el otro tubo con AgNO3 Tienden a un color lila

Etanol

Acetona Precipitación Se observo que se formaron partículas pequeñas que se fueron precipitando lentamente hasta

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