Bosque De Encino

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

“DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL “

REPORTE DE PRACTICAS DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA

Alumno: Anguiano Aviña Fernando

Grupo: 5QM1

Introducción.

Es preciso comenzar estableciendo que la cromatografía de manera general es un proceso de migración diferencial de las partículas en base a su afinidad por la fase móvil. La ventaja de la cromatografía bidimensional con respecto a la cromatografía unidireccional es que en el caso de la unidireccional lo que se observa como una mancha puede ser en realidad dos o más componentes de una mezcla, es por ello que la cromatografía bidimensional es una cromatografía unidireccional repetida más una vez en la misma placa pero con un disolvente distinto para que mediante a la polaridad de los diferentes disolventes y componentes de la muestra, estos últimos puedan separarse por dicha propiedad.

Los componentes que integran a la cromatografía son:

 Fase estacionaria: Silica gel --- polar / Alúmina Al2O3

 Fase móvil: Cloroformo – metanol. NH4OH 17%; Butanol – Ácido acético – H2O

 Analito: Aminoácidos

 Soporte: Aluminio

Cabe mencionar que para que se dé la separación de los componentes de una mezcla en una cromatografía de este estilo, es importante considerar diversas fuerzas que actúan en el proceso, principalmente las de tipo dipolo- dipolo, puentes de hidrogeno, fuerzas de London, etc

Un aspecto trascendental que se debe de tomar mucho en cuenta para elegir de manera correcta a la fase móvil es la polaridad, ya que cuando los componentes de la fase móvil tiene diferente polaridad que las del analito, se dice que estos son inmiscibles, es decir que entre más polar sea el analito, la interacción es más fuerte y es mayormente retenido.

A continuación se muestra un ejemplo de cromatograma de una cromatografía bidimensional y su identificación mediante la medición y comparación de los Rf

Objetivos:

 Separar los aminoácidos presentes en jugo de frutas por cromatografía bidimensional en capa fina

 Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de la soluciones tipo de aminoácidos

 Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la cromatografía unidireccional

Resultados:

Tabla 1. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 Fases móviles

Aminoácido 1 Fase móvil

Cloroformo-Metanol-Amoniaco 2 Fase móvil

Butano-Ac. Acético-Agua

Frente del soluto Frente del disolvente Rf Frente del soluto Frente del disolvente Rf

Arg 2.1 7.5 0.28 1.1 8.3 0.1325

Lys 3.6 7.5 0.48 0.9 8.3 0.1084

Pro 5 7.5 0.66 2.4 8.3 0.2871

Gly 6 7.5 0.80 2.2 8.3 0.2650

His 6.3 7.5 0.84 1 8.3 0.1204

Glu 6.4 7.5 0.83 3.1 8.3 0.3734

Thr 6.5 7.5 0.86 3 8.3 0.3614

Tyr 6.6 7.5 0.88 5 8.3 0.6024

Met 7 7.5 0.93 4.7 8.3 0.5662

Phe 7.3 7.5 0.973 5.4 8.3 0.6506

Imagen 1-2 Esquema del cromatrograma con los diferentes disolventes respectivamente

No.

Mancha 1 Fase móvil

Cloroformo-Metanol-Amoniaco 2 Fase móvil

Butano-Ac. Acético-Agua Aminoácido correspondiente

Frente del soluto Frente del disolvente Rf Frente del soluto Frente del disolvente Rf

1 2 7.7 0.259 1.6 8.2 0.192 Arg

2 2.9 7.7 0.376 1.2 8.2 0.146 Lys

3 3 7.7 0.378 0.6 8.3 0.072 Pro

4 3.7 7.7 0.474 3 8.4 0.357 Glu

5 4.5 7.7 0.584 2.9 8.3 0.349 Gly

6 5.4 7.7 0.701 2.8 8.3 0.337 Thr

7 5.7 7.7 0.740 1 8.4 0.119 Hys

8 5.8 7.7 0.753 4.9 8.3 0.590 Tyr

9 6.5 7.7 0.855 4.6 8.3 0.554 Met

10 6.8 7.7 0.883 5.4 8.3 0.650 Phe

Tabla 2. Cromatograma Bidimensional Tipo desarrollado en las 2 fases móviles

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