Brucella Abortus

DIVISIÓN DE BIOTECNOLOGÍA

IMPLEMENTACIÓN DE PRUEBA ELISA PARA Brucella abortus

REPORTE TÉCNICO

PARA OBTENER EL TÍTULO DE

TÉCNICO SUPERIOR UNIVERSITARIO

EN BIOTECNOLOGÍA

PRESENTA

INSTITUCIÓN: CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICO EN SALUD ANIMAL (CENASA)

GENERACIÓN MAYO 2010-ABRIL 2012

CARTA DE AUTORIZACIÓN

DEDICATORIAS Y AGRADECIMIENTOS

El presente trabajo se lo dedico a mis padres Modesta Ramírez Domínguez y Juan Pablo Bravo Clemente por el gran apoyo que siempre me han brindado, por su cariño y muy sincero amor, también para mi esposos Enrique Daniel Pérez González por el apoyo incondicional que me ha dado, mis hermanos José Antonio, Juan Pablo y María de los Ángeles, y mis amigos Roberto Romero Ortiz, Alejandro Valle Patlan, Jazmín Rosas Hernández y Karla García González.

Los agradecimientos por todo su apoyo y esperanza puesta en mi es para mis padres, mi esposo y mi hermano José Antonio que nunca han dejado de creer en mí y espero nunca lo hagan.

También quiero agradecerles de todo corazón a todos mis profesores que ayudaron en mi formación académica, a mis asesores industriales Martha Isabel Rosado Rodríguez y Samuel González Nuñez por todo el apoyo y paciencia para enseñarme; y a mis asesores académicos.

¡¡A TODOS MUCHAS GRACIAS!!

ÍNDICE DE CONTENIDO

Carta de autorización 2

Dedicatorias y agradecimiento 3

Resumen 8

Abstrac 9

Abreviaturas 10

1. Objetivos 11

Cronograma 12

2. Introducción 13

2.1. Etiología 15

2.2. Estructura y composición química 16

2.2.1 Estructura externa 16

2.2.2 Estructura interna 18

2.3. Respuesta inmune 18

2.4. Patogenia 19

2.5. Hábitat 21

2.6. Situación actual 22

2.7. Prueba en Tarjeta o Rosa de Bengala 24

2.8. Prueba de rivanol 24

2.9. Fijación de complemento 25

2.10. Prueba de Anillo en leche 27

2.11. Vacunas 29

2.11.1 B. abortus Cepa 19 30

2.11.2 Vacuna cepa RB51 32

2.11.3 Identificación 33

2.12. Prueba ELISA 33

2.12.1 ELISA indirecto 34

2.12.2 ELISA competitivo 35

3. Materiales y métodos 37

3.1 Materiales Biológicos 37

3.1.1 Sueros problema 37

3.1.2 Equipo de protección 37

3.2 Materiales y Métodos para la Prueba de Tarjeta 37

3.2.1 Biológicos 37

3.2.2 Equipo 37

3.2.3 Instrumentos 37

3.2.4 Metodología 38

3.3 Materiales y métodos para la Prueba de Fijación de complemento 38

3.3.1 Biológicos 38

3.3.2 Reactivos 38

3.3.3 Equipo 38

3.3.4 Instrumentos 39

3.3.5 Metodología 39

3.4 Materiales y métodos para la Prueba de ELISA 40

3.4.1 Kit ELISA 40

3.4.2 Instrumentos 41

3.4.3 Equipo 41

3.4.4 Metodología 41

4. Resultados y discusión 44

5. Conclusión 46

6. Anexos 47

6.1Glosario 47

7. Referencias 48

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Brucella abortus 15

Figura 2. Brucella lisa y rugosa 16

Figura 3 Esquema simplificado de la membrana externa de la pared celular de

Brucella 17

Figura 4. Penetración de Brucella abortus 20

Figura 5. Situación actual de la brucelosis en México 22

Figura 6. Control positivo y Negativo para la prueba de Tarjeta 24

Figura 7. Placa de prueba de Rivanol con diluciones desde 1/25 a 1/400 25

Figura 9. Control positivo y Negativo para la prueba de Fijación de

Complemento 26

Figura 10. Placa de la prueba de fijación de complemento 27

Figura 11. Control positivo y Negativo para la prueba de anillo en leche 28

Figura 12. ELISA indirecta 34

Figura 13. ELISA competitiva 35

Figura 14. Sueros problema 36

Figura 15. Kit ELISA utilizado 39

Figura 16. Placa 1 41

Figura 17. Placa 2 41

Figura 18. Lector de ELISA con la placa a leer 42

ÍNDICE DE CUADROS

Cuadro 1. Tiempo de vida de la Brucella 21

Cuadro 2. Situación actual de México 23

Cuadro 3. Interpretación de resultados 27

Cuadro 4. Lectura de color del anillo en leche y de la columna de leche 28

Cuadro 5. Comparativo de las pruebas ELISA, Tarjeta y FC’ 44

ÍNDICE DE GRÁFICAS

Grafica 1. Comparativo de % de positivos y negativos de acuerdo a las pruebas realizadas 45

RESUMEN

El propósito del presente trabajo fue implementar la prueba ELISA para el diagnóstico de Brucella abortus, así como poder evaluar la eficiencia de la prueba de Tarjeta o Rosa de Bengala y Fijación de Complemento. Dichos análisis se realizaron en 76 muestras de bovinos provenientes de diferentes estados del país, las cuales fueron llevadas al CENASA para su diagnóstico.

Primeramente, todas las muestras fueron sometidas a la prueba de tarjeta o Rosa de Bengala en la cual hubo un 63% de reacciones positivas. Posteriormente se evaluaron con la prueba de Fijación de Complemento donde se obtuvo el 59% de casos positivos; y por último se efectúo la prueba ELISA que arrojó un 60% de resultados positivos.

Lo cual permite concluir que la prueba ELISA es una herramienta muy útil en el diagnóstico de brucelosis en bovinos, la cual cuenta con alta especificidad y sensibilidad, ya que permite detectar anticuerpos vacúnales y no vacunales de Brucella cepa C19. Sin embargo, el elevado costo de equipo es una limitante para incluir la prueba de ELISA como parte de las pruebas tamiz que se realizan en campaña ni tampoco formar parte hasta el momento de la norma.

ABSTRACT

The purpose of this study

...