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CAMBIOS EN LA EXPRESIÓN DEL RECEPTOR HER-2 EN LA LÍNEA CELULAR DE CARCINOMA MAMARIO MCF-7


Enviado por   •  30 de Agosto de 2011  •  953 Palabras (4 Páginas)  •  1.009 Visitas

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CAMBIOS EN LA EXPRESIÓN DEL RECEPTOR HER-2 EN LA LÍNEA CELULAR DE CARCINOMA MAMARIO MCF-7

RESUMEN

El receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico, denominado HER-2 por sus siglas en inglés Human Epidermal growth factor Receptor-2, es una oncoproteína que se sobre expresa entre el 25% y el 30% de los carcinomas mamarios humanos invasivos y se asocia con pronósticos clínicos desfavorables [1]. HER-2 se encuentra disperso en la membrana de las células cancerosas, forma dímeros que activan señales intracelulares que inducen la proliferación celular, cuando se produce en cantidades excesivas las células proliferan sin control y a mayor velocidad que las células no cancerosas, contribuyendo con la aparición y la progresión del cáncer de mama [2]. Existen reportes contradictorios con respecto a la expresión del receptor HER-2 en la línea celular MCF-7, donde algunos investigadores las utilizan como control negativo [3], otros señalan su baja expresión [4] y pocos reportes que señalan que éste puede ser inducido [5].

Debido a que esta línea celular es empleada en estudios de microscopía de fuerza atómica (AFM) por nuestro grupo de investigación, se analizó su expresión y localización por medio de la técnica de inmunocitoquímica.

En el presente trabajo se utilizaron las líneas celulares de carcinoma mamario MCF-7 y MDA MB-231 (negativa para HER-2), donadas por el Dr. A. Zentella (Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán). Las células se crecieron como se reporta previamente [6] con DMEM (Dulbecco´s Modified Eagle Medium) conteniendo L-glutamina, antibióticos y suplementado con 10% de Suero de feto bovino Fetal (SBF) durante 24 horas, en una atmósfera de 95% de aire y 5% de CO2 a 37°C, hasta una confluencia de 80%. Las células se incubaron con DMEM/SBF al 5% por 24 horas, se subcultivaron en laminillas con poli L-lisina por 48 horas hasta llegar a una confluencia del 50% y durante 24 horas en DMEM, conteniendo SBF (2.5%) tratado con carbón/dextrán. Las células se fijaron con etanol absoluto frío y para la inmunocitoquímica se utilizó un anticuerpo primario anti-HER-2 en concentración 1:100 por 30 minutos (Dako, Carpinteria, CA), uno secundario marcado con peroxidasa (Biotin-Link, mouse/rabbit), se utilizó el sistema de detección Estreptavidina-biotina-peroxidasa (Dako), se visualizó mediante el cromógeno Diaminobencidina (DAB; Sigma, St Louis, MO), se contrastó con hematoxilina y las células se analizaron por microscopía óptica.

En las células MCF-7 se observó heterogeneidad con respecto a la expresión y la localización de HER-2, mientras que en algunas la expresión fue muy baja, casi negativa (figura 1), en otras fue alta, ocupando más del 50% de la superficie celular (figura 2). Con respecto a la localización, en las células positivas a HER-2 se presenta en la región perinuclear, pero no en forma homogénea, sino polarizada hacia uno de los extremos (figura 3). En algunos casos se observa internalización del receptor, ya que la marca es principalmente intracelular (figura 4). Estas diferencias de

expresión de HER-2 sugieren que existen mecanismos que regulan su expresión dependiendo de la fase del ciclo celular en la que se encuentran las células; por lo que se procedió a sincronizar las células por privación de suero. Las células MDA MB-231 no presentaron expresión de

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