Características y mecanismos de la inmunología adaptativa

ÍNDICE

RECUENTO DE LINFOCITOS VIABLES        3

I.        OBJETIVOS        3

II.        MARCO TEÓRICO        3

III.        MATERIALES        4

MATERIAL BIOLÓGICO        4

MATERIAL DE LABORATORIO        4

IV.        PROCEDIMIENTO        5

V.        RESULTADO        5

VI.        COMENTARIO        6

VII.        CONCLUSIONES        7

VIII.        REFERENCIAS LINKOGRÁFICAS        7

RECUENTO DE LINFOCITOS VIABLES

1. OBJETIVOS

• Adiestrar al alumno en el manejo, reconocimiento y recuento de linfocitos viables
• Capacitar al alumno en el trabajo inmunológico con células viables.

1. MARCO TEÓRICO

Son células que circulan en la sangre y son parte del sistema inmunológico, hay tres tipos principales de linfocitos:

• Las células B producen anticuerpos los cuales se unen y destruyen los virus o las bacterias invasoras.
• Las células T son combatientes directos de los invasores extraños y también productoras de citoquinas, las cuales son sustancias biológicas que ayudan a activar otros componentes del sistema inmunológico, uno de los cuales son los macrófagos. (1)
• Linfocitos NK

La tasa de renovación linfocitaria es muy elevada: se calcula que cada día se producen 109 linfocitos en los órganos linfoides primarios y que diariamente se renueva el 2% de los linfocitos. En un organismo humano normal existen alrededor de 1012 células linfoides. (2)

Los linfocitos participan principalmente en la inmunidad específica o adquirida, a excepción de los linfocitos T gamma-delta y los asesinos naturales, que son capaces de establecer contacto y eliminar directamente a un antígeno, durante la etapa de actividad de la inmunidad natural. (2)

Un conteo o recuento de linfocitos, es una prueba mide la cantidad de linfocitos en la sangre. Esta prueba tiene como objetivo ver si la persona tiene un recuento de linfocitos más alto de lo normal, ya que esto puede presentarse sin ningún tipo de síntomas. Un recuento alto de linfocitos puede ocurrir después de una enfermedad, es temporario y no hace daño. Pero puede representar algo más grave, como cáncer en la sangre o una infección crónica. (3)

1. MATERIALES

MATERIAL BIOLÓGICO

• Ratón blanco

MATERIAL DE LABORATORIO

• Agua destilada estéril
• Algodón
• Alcohol Yodado
• Cloroformo
• Estuche de disección
• Estufa
• Lactato de Ringer o Buffer fosfato salino (PBS)
• Láminas portaobjetos
• Laminillas cubre objeto
• Microscopio compuesto
• Nigrosina al 0.2 %
• Pipeta de 2 5 mL.
• Pipetas Pasteur
• Placa de petri
• Refrigeradora.
• Tubos de ensayo de 13 x 100 mm

1. PROCEDIMIENTO

1. Anestesiar a un ratón con cloroformo.
2. Hacer la disección y extraer el bazo. Luego colocarlo en una placa Petri con SSF y Lactato Ringer o Buffer fosfato salino (PBS), previamente refrigerado.
3. Triturar el bazo manteniendo en todo momento la placa petri sobre hielo.
4. La suspensión obtenida, colocarlo en un tubo de ensayo.
5. Añadir unas cuantas gotas de nigrosina al 0.2% e incubar a 37 o C por 3 minutos, para facilitar la incorporación del colorante dentro de la célula muerta.
6. Luego homogenizar muy suavemente y tomar una gota de la suspensión y colocarlo en una lámina portaobjetos y cubrir con laminilla. Observar al microscopio y realizar el recuento de 100 células (vivas o viables y muertas), lo cual corresponde al tiempo cero. El tubo conservarlo a 4 o C.
7. Este último paso será repetido 4 veces a los 5, 10, 15 y 20 minutos.

1. RESULTADO

[pic 1]

[pic 2]

Gráfico 1: En el que se expresa el porcentaje de linfocitos viables en

función al tiempo después de añadir el colorante.

1. COMENTARIO

La práctica se basa en el recuento de linfocitos viables es decir linfocitos vivos. El animal que comúnmente se suele usar el ratón, se extrae la muestra del bazo de este. La muestra debe permanecer en un ambiente frío, y para esto se usa el hielo.

Un vez de haber realizado el procedimiento se obtiene la suspensión, se añade gotas de nigrosina (colorante de contraste, de color negro. No colorea las células vivas). Debido a que la nigrosina solo actúa en células muertas, los linfocitos vivos se apreciarán en el microscopio como transparentes.

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